Gå direkte til indholdet
Væv
Embryo
Sygdom
Normale embryonale fibroblaster fra mus (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-immortaliserede; NHEJ-defekte)
Metastasested
Ikke relevant (immortaliserede MEF-celler; ikke en klinisk tumorprøve)
Synonymer
Ku80-/- MEF

Dokumenter

Ku 80-/-

Cell line · Varenummer 305258

€550.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
  • CoA
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

Ku80-/- MEF-celler (Mouse Embryonic Fibroblast) er genetisk manipulerede fibroblastceller fra mus, der mangler Ku80-genet (XRCC5). Ku80-proteinet danner sammen med Ku70 Ku-heterodimeren, som er afgørende for den non-homologe end joining (NHEJ)-vej til reparation af DNA-dobbeltstrengsbrud (DSB). Fraværet af Ku80 i disse celler forringer deres evne til effektivt at reparere DSB'er, hvilket gør dem til en værdifuld model til undersøgelse af NHEJ-vejens rolle i genomisk stabilitet, DNA-reparationsmekanismer og kræftbiologi.

Ku80-/- MEF-celler udviser øget følsomhed over for ioniserende stråling og andre DNA-skadelige stoffer på grund af deres kompromitterede DSB-reparationskapacitet. Disse celler har også en tendens til at akkumulere kromosomafvigelser og udvise genomisk ustabilitet. Manglen på Ku80 påvirker ikke kun DNA-reparation, men også andre cellulære processer såsom V(D)J-rekombination, som er afgørende for udviklingen af et mangfoldigt repertoire af antistoffer og T-cellereceptorer i immunsystemet.

Forskning med Ku80-/- MEF-celler har givet betydelig indsigt i de molekylære mekanismer i NHEJ og de bredere konsekvenser af mangelfuld DNA-reparation. Disse undersøgelser er afgørende for at forstå udviklingen af kræft og andre sygdomme, der er forbundet med genomisk ustabilitet. Derudover hjælper de med at udforske potentielle terapeutiske mål for at forbedre DNA-reparation i kræftceller og dermed forbedre effekten af kræftbehandlinger, der er afhængige af at fremkalde DNA-skader i tumorceller.

Væv
Embryo
Sygdom
Normale embryonale fibroblaster fra mus (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-immortaliserede; NHEJ-defekte)
Metastasested
Ikke relevant (immortaliserede MEF-celler; ikke en klinisk tumorprøve)
Anvendelser
Forskning i NHEJ-DNA-reparation; Ku80/XRCC5-funktion; reparation af dobbeltstrengsbrud (DSB) i DNA; modellering af genomisk ustabilitet; strålefølsomhed; V(D)J-rekombination; kræftbiologi; genotoksicitetstest; respons på DNA-skader
Synonymer
  • Ku80-/- MEF

02Klassificering

Organisme
Mus
Køn
Uspecificeret
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This MEF line carries homozygous Ku80 (XRCC5) knockout and SV40 large T antigen immortalization. The SV40 transgene is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
2

03Egenskaber

Morfologi
Fibroblast-lignende
Celletype
Fibroblast

04Identifikatorer

Kildehenvisning
Ku 80-/- (Cytion katalognummer 305258)
NCBI-skattenummer
10090
Cellosaurus
CVCL_UJ16

05Udtryk og modtagelighed

Mutationsprofil
Mutation: Ku80-/-
Vira
Transformant: Simian virus 40 (SV40)

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
12-13 fosterdage
Etnisk tilhørsforhold
Ikke relevant (musecellelinje)