Tartalomra ugrás
Szövet
Embrió
Betegség
Normál egér embrionális fibroblaszt (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-vel halhatatlanná tett; NHEJ-hiányos)
Áttétes hely
Nem alkalmazható (halhatatlanná tett MEF; nem klinikai daganati minta)
Szinonimák
Ku80-/- MEF

Dokumentumok

Ku 80-/-

Cell line · Termékszám 305258

€550.00adó és szállítási költség nélkül
Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

A Ku80-/- MEF (Mouse Embryonic Fibroblast) sejtek olyan egerekből származó, genetikailag módosított fibroblaszt sejtek, amelyekből hiányzik a Ku80 gén (XRCC5). A Ku80 fehérje a Ku70-zel együtt a Ku heterodimert alkotja, amely nélkülözhetetlen a DNS kettősszál-törés (DSB) javításának nem-homológ végcsatlakozási (NHEJ) útvonalához. A Ku80 hiánya ezekben a sejtekben rontja a DSB-k hatékony javításának képességét, így értékes modellé válnak az NHEJ útvonal genomi stabilitásban, DNS-javító mechanizmusokban és a rákbiológiában betöltött szerepének tanulmányozására.

A Ku80-/- MEF sejtek fokozott érzékenységet mutatnak az ionizáló sugárzással és más DNS-károsító ágensekkel szemben, ami a DSB-javító képességük csökkenésének köszönhető. Ezek a sejtek hajlamosak kromoszóma-rendellenességek felhalmozódására és genomiális instabilitásra is. A Ku80 hiánya nem csak a DNS-javítást, hanem más sejtfolyamatokat is befolyásol, mint például a V(D)J rekombinációt, amely döntő fontosságú az immunrendszerben az antitestek és T-sejt receptorok változatos repertoárjának kialakulásához.

A Ku80-/- MEF sejtekkel végzett kutatások jelentős betekintést nyújtottak az NHEJ molekuláris mechanizmusaiba és a hibás DNS-javítás tágabb értelemben vett következményeibe. Ezek a vizsgálatok kulcsfontosságúak a rák és más, genomiális instabilitással járó betegségek kialakulásának megértéséhez. Emellett segítenek a rákos sejtekben a DNS-javítás fokozását célzó potenciális terápiás célpontok feltárásában, ezáltal javítva a daganatsejtekben DNS-károsodás kiváltására épülő rákkezelések hatékonyságát.

Szövet
Embrió
Betegség
Normál egér embrionális fibroblaszt (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-vel halhatatlanná tett; NHEJ-hiányos)
Áttétes hely
Nem alkalmazható (halhatatlanná tett MEF; nem klinikai daganati minta)
Alkalmazások
NHEJ DNS-javítási kutatás; a Ku80/XRCC5 működése; a DNS kettős szálú törés (DSB) javítása; a genomikus instabilitás modellezése; sugárérzékenység; V(D)J-rekombináció; rákbiológia; genotoxicitási vizsgálatok; DNS-károsodásra adott válasz
Szinonimák
  • Ku80-/- MEF

02Osztályozás

Organizmus
Egér
Szex
Nem meghatározott
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This MEF line carries homozygous Ku80 (XRCC5) knockout and SV40 large T antigen immortalization. The SV40 transgene is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
2

03Jellemzők

Morfológia
Fibroblaszt-szerű
Sejttípus
Fibroblasztok

04Azonosítók

Hivatkozás
Ku 80-/- (Cytion katalógusszám: 305258)
NCBI adóazonosító szám
10090
Cellosaurus
CVCL_UJ16

05Kifejeződés és fogékonyság

Mutációs profil
Mutáció: Ku80-/-
Vírusok
Transzformáns: Simian virus 40 (SV40)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
12-13 magzati nap
Etnikai hovatartozás
Nem alkalmazható (egérsejtvonal)