- Szövet
- Embrió
- Betegség
- Normál egér embrionális fibroblaszt (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-vel halhatatlanná tett; NHEJ-hiányos)
- Áttétes hely
- Nem alkalmazható (halhatatlanná tett MEF; nem klinikai daganati minta)
- Szinonimák
- Ku80-/- MEF
Dokumentumok
Ku 80-/-
Cell line · Termékszám 305258
Személyre szabás / Ajánlások
- Ku 80-/-Cell line€550.00
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
01Általános információk
- Leírás
A Ku80-/- MEF (Mouse Embryonic Fibroblast) sejtek olyan egerekből származó, genetikailag módosított fibroblaszt sejtek, amelyekből hiányzik a Ku80 gén (XRCC5). A Ku80 fehérje a Ku70-zel együtt a Ku heterodimert alkotja, amely nélkülözhetetlen a DNS kettősszál-törés (DSB) javításának nem-homológ végcsatlakozási (NHEJ) útvonalához. A Ku80 hiánya ezekben a sejtekben rontja a DSB-k hatékony javításának képességét, így értékes modellé válnak az NHEJ útvonal genomi stabilitásban, DNS-javító mechanizmusokban és a rákbiológiában betöltött szerepének tanulmányozására.
A Ku80-/- MEF sejtek fokozott érzékenységet mutatnak az ionizáló sugárzással és más DNS-károsító ágensekkel szemben, ami a DSB-javító képességük csökkenésének köszönhető. Ezek a sejtek hajlamosak kromoszóma-rendellenességek felhalmozódására és genomiális instabilitásra is. A Ku80 hiánya nem csak a DNS-javítást, hanem más sejtfolyamatokat is befolyásol, mint például a V(D)J rekombinációt, amely döntő fontosságú az immunrendszerben az antitestek és T-sejt receptorok változatos repertoárjának kialakulásához.
A Ku80-/- MEF sejtekkel végzett kutatások jelentős betekintést nyújtottak az NHEJ molekuláris mechanizmusaiba és a hibás DNS-javítás tágabb értelemben vett következményeibe. Ezek a vizsgálatok kulcsfontosságúak a rák és más, genomiális instabilitással járó betegségek kialakulásának megértéséhez. Emellett segítenek a rákos sejtekben a DNS-javítás fokozását célzó potenciális terápiás célpontok feltárásában, ezáltal javítva a daganatsejtekben DNS-károsodás kiváltására épülő rákkezelések hatékonyságát.
- Szövet
- Embrió
- Betegség
- Normál egér embrionális fibroblaszt (Ku80/XRCC5-knockout; SV40-vel halhatatlanná tett; NHEJ-hiányos)
- Áttétes hely
- Nem alkalmazható (halhatatlanná tett MEF; nem klinikai daganati minta)
- Alkalmazások
- NHEJ DNS-javítási kutatás; a Ku80/XRCC5 működése; a DNS kettős szálú törés (DSB) javítása; a genomikus instabilitás modellezése; sugárérzékenység; V(D)J-rekombináció; rákbiológia; genotoxicitási vizsgálatok; DNS-károsodásra adott válasz
- Szinonimák
- Ku80-/- MEF
02Osztályozás
- Organizmus
- Egér
- Szex
- Nem meghatározott
- Növekedési tulajdonságok
- Hűséges
- GMO-státusz
- GMO-S1
- A GMO-státuszra vonatkozó részletek
- GMO-S1: This MEF line carries homozygous Ku80 (XRCC5) knockout and SV40 large T antigen immortalization. The SV40 transgene is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biológiai biztonsági szint
- 2
03Jellemzők
- Morfológia
- Fibroblaszt-szerű
- Sejttípus
- Fibroblasztok
04Azonosítók
- Hivatkozás
- Ku 80-/- (Cytion katalógusszám: 305258)
- NCBI adóazonosító szám
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_UJ16
05Kifejeződés és fogékonyság
- Mutációs profil
- Mutáció: Ku80-/-
- Vírusok
- Transzformáns: Simian virus 40 (SV40)
06Kezelés és tenyésztés
- Táptalaj
- DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
- Inkubációs környezet
37°C, 5%CO2, párásított légkör.
- Kiegészítők
- A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
- Diszociációs reagens
- Accutase
- Átültetés
- Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
- Felolvasztás és tenyésztés
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás
- Meddőség
A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.
A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.
- Fagyasztóközeg
- Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
- Tárolási feltételek
Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.
- Szállítási feltételek
A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.
08Adományozó
- Az adományozó életkora
- 12-13 magzati nap
- Etnikai hovatartozás
- Nem alkalmazható (egérsejtvonal)
09Jogi és biztonsági információk
- Biztonsági óvintézkedések
- Ha egy kriovialitást folyékony nitrogénben tervezünk tárolni a későbbi kiolvasztás céljából, akkor kötelező betartani a szigorú biztonsági intézkedéseket. A megfelelő védőkesztyű és védőruházat elengedhetetlen, és a fagyasztott minták folyékony nitrogéntartályba vagy a folyékony nitrogéntartályból történő átvitele során arcmaszk vagy védőszemüveg használata szükséges. Ez azért van, hogy csökkentsék a kriovialis anyagok eltávolításakor bekövetkező esetleges robbanásból eredő sérülésveszélyt, amely éles szilánkok kilövellését eredményezheti.
- Garancia
A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak
A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban
- Anyagátadási megállapodás szükséges
- Igen