Pāriet uz saturu
Human Gingival Fibroblasts (hGF)
Audums
Gingiva
Sinonīmi
HGF, HFIB-G, Human fibroblasts, gingiva, provitro 1210412

Dokumenti

Human Gingival Fibroblasts (hGF)

Primary cell · Preces numurs 300703

Oral fibroblasts for periodontal and dental research

€650.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Pēc pasūtījuma
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Cilvēka smaganu fibroblasti (hGF) ir primārās šūnas, kas iegūtas no mutes dobuma gingīvu jeb smaganu saistaudiem. Šiem fibroblastiem ir izšķiroša nozīme smaganu audu strukturālās integritātes uzturēšanā, jo tie ražo ekstracelulārā matriksa sastāvdaļas, tostarp kolagēnu, elastīnu un glikozaminoglikānus. To spēja proliferēt un migrēt ir būtiska brūču dzīšanai, audu atjaunošanai un atbildes reakcijai uz periodonta slimībām. Papildus strukturālajām funkcijām hGF ir iesaistīti iekaisuma reakcijās smaganās, mijiedarbojoties ar dažādām imūnšūnām un starpniekojot citokīnu un augšanas faktoru izdalīšanos. Tas padara tās par galveno šūnu modeli mutes dobuma veselības, periodonta slimību un audu reģenerācijas izpētei.

hGF šūnas plaši izmanto pētījumos, kas vērsti uz mutes dobuma bioloģiju, jo īpaši periodonta slimību patofizioloģijas izpratnē, kur lielu interesi izraisa fibroblastu un patogēno baktēriju, piemēram, *Porphyromonas gingivalis*, mijiedarbība. Šīs šūnas tiek izmantotas arī audu inženierijā un reģeneratīvajā medicīnā, jo īpaši izstrādājot terapiju smaganu un periodonta defektu ārstēšanai. Bieži tiek pētīta to reakcija uz dažādiem biomateriāliem, augšanas faktoriem un ekstracelulārā matriksa komponentiem, lai optimizētu apstākļus audu atjaunošanai un reģenerācijai mutes dobuma ķirurģijā un zobu implantos.

Audums
Gingiva
Pieteikumi
Audu reģenerācija, brūču dzīšanas pētījumi
Sinonīmi
  • HGF
  • HFIB-G
  • Human fibroblasts
  • gingiva
  • provitro 1210412

02Ziedotājs

Donora vecums
Lot-specific (see CoA)
Etniskā piederība
Lot-specific (see CoA)

03Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Atkarībā no partijas
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

04Raksturlielumi

Morfoloģija
Spindle-shaped (fibroblast-like)
Šūnu tips
Fibroblasti
Tumorogēns
No

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS, 10 ng/ml bFGF, 10 mikrogramu/l insulīna
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
More than 4,000 cells/cm²
Šķidruma atjaunošana
24 hours after seeding, then every 48 to 72 hours
Atgūšanās pēc atkusņa

Post-thaw viability ≥ 70 % viable cells. More than 80 % confluence within the expected recovery period.

Atkausēšana un kultivēšana
  1. Thaw the cryovial quickly in a 37 °C water bath, swirling gently. Just before the last ice has melted, move the vial to a laminar flow hood and decontaminate its outer surface.

  2. Transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube, add 10 ml of Fibroblast Growth Medium and centrifuge at 250 × g for 5 minutes.

  3. Remove the supernatant and resuspend the cell pellet in 10 ml of Fibroblast Growth Medium. Check cell number and viability.

  4. Divide the suspension between two 25 cm² culture flasks (5 ml each). Using two flasks reduces the risk of losing all cells if a passage fails.

  5. Incubate at 37 °C, 5 % CO₂ and saturated humidity, with the screw caps opened by half a turn for gas exchange.

  6. Change the medium after 24 hours to remove unattached cells, then every 48 to 72 hours, using pre-warmed medium only.

  7. Subculture the cells at about 75 % confluence. Denser cultures undergo irreversible contact inhibition and stop proliferating. Use the subculture reagents recommended on the certificate of analysis.

  8. Recommended seeding density: more than 4,000 cells/cm².

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam 90 % FBS + 10 % DMSO dzīvotspējas uzturēšanai vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Identifikatori

Atsauce
Cilvēka smaganu fibroblasti (hGF) (Cytion kataloga numurs 300703)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606