IEC-18

Linia komórkowa IEC-18 to nietransformowana linia komórek nabłonkowych pochodząca z komórek krypt jelita cienkiego szczura. Wykazano, że komórki te skutecznie modelują fizjologiczne właściwości nabłonka jelita cienkiego, szczególnie w odniesieniu do transportu jonów chlorkowych (Cl-). Kanały chlorkowe w komórkach IEC-18 wykazują różne typy przewodnictwa, które reagują na różne bodźce, takie jak obrzęk komórek, zwiększony poziom wapnia wewnątrzkomórkowego (Ca²⁺) i podwyższony poziom cyklicznego AMP (cAMP). Na przykład, aktywowane pęcznieniem prądy Cl- w komórkach IEC-18 charakteryzują się prostowaniem na zewnątrz i niezależnością od napięcia. Co więcej, komórki IEC-18 wykazują ekspresję kanałów CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator), o czym świadczy obecność aktywowanego cAMP przewodnictwa Cl-, które może być hamowane przez glibenklamid i kwas 5-nitro-2-(3-fenylopropyloamino) benzoesowy (NPPB), ale nie ma na nie wpływu DIDS.

Komórki IEC-18 zostały również wykorzystane do zbadania mechanizmów przeżycia komórek pod wpływem stresu wywołanego oderwaniem, znanego jako anoikis. Badania wskazują, że prostaglandyna E2 (PGE2) może promować żywotność i agregację komórek w odłączonych komórkach IEC-18 poprzez szlaki sygnałowe, w których pośredniczy cAMP. Ta ochrona przed anoikis jest związana z aktywacją cyklazy adenylanowej i kinazy białkowej A (PKA), zwiększając adhezję i żywotność komórek nawet w stanie zawieszenia. Takie odkrycia są istotne dla zrozumienia procesów związanych ze stanem zapalnym i potencjalnym wkładem w karcynogenezę w tkankach jelit.

Ponadto, monowarstwy IEC-18 zostały wykorzystane do badania transportu różnych cząsteczek przez barierę jelitową. W porównaniu z linią komórkową Caco-2, komórki IEC-18 zapewniają dokładniejszy model pasywnego transportu przezkomórkowego i parakomórkowego ze względu na ich podobieństwo strukturalne do komórek krypt jelita cienkiego. W przeciwieństwie do komórek Caco-2, które posiadają znaczne możliwości aktywnego transportu, komórki IEC-18 wykazują minimalny transport za pośrednictwem nośnika, co czyni je bardziej odpowiednim wyborem do analizy biernej przepuszczalności hydrofilowych makrocząsteczek.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym