IEC-18

A linha de células IEC-18 é uma linha de células epiteliais não transformadas derivada das células da cripta do intestino delgado do rato. Demonstrou-se que estas células modelam eficazmente as propriedades fisiológicas do epitélio do intestino delgado, particularmente no que diz respeito ao transporte de iões cloreto (Cl-). Os canais de cloreto nas células IEC-18 exibem tipos distintos de condutâncias que respondem a vários estímulos, como inchaço celular, aumento do cálcio intracelular (Ca²⁺) e AMP cíclico elevado (cAMP). Por exemplo, as correntes Cl- ativadas por inchaço nas células IEC-18 são caracterizadas por retificação externa e independência de tensão. Além disso, as células IEC-18 expressam canais reguladores da condutância transmembranar da fibrose cística (CFTR), evidenciados pela presença de condutância Cl- activada por AMPc, que pode ser inibida por glibenclamida e ácido 5-nitro-2-(3-fenilpropilamino) benzoico (NPPB), mas não afetada por DIDS.

As células IEC-18 também foram utilizadas para explorar os mecanismos de sobrevivência celular sob stress induzido pela descolagem, conhecido como anoikis. A investigação indica que a prostaglandina E2 (PGE2) pode promover a viabilidade e a agregação celular em células IEC-18 destacadas através de vias de sinalização mediadas por cAMP. Esta proteção contra o anoikis está associada à ativação da adenilato ciclase e da proteína quinase A (PKA), aumentando a adesão e a viabilidade das células mesmo em estados suspensos. Estes resultados são importantes para compreender os processos relacionados com a inflamação e as potenciais contribuições para a carcinogénese nos tecidos intestinais.

Além disso, as monocamadas IEC-18 têm sido utilizadas para estudar o transporte de várias moléculas através da barreira intestinal. Em comparação com a linha celular Caco-2, as células IEC-18 constituem um modelo mais exato para o transporte passivo transcelular e paracelular devido às suas semelhanças estruturais com as células da cripta do intestino delgado. Ao contrário das células Caco-2, que possuem capacidades de transporte ativo significativas, as células IEC-18 demonstram um transporte mediado por transportador mínimo, o que as torna uma escolha mais adequada para analisar a permeabilidade passiva de macromoléculas hidrofílicas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia