IEC-18

A linhagem celular IEC-18 é uma linhagem de células epiteliais não transformadas, derivada das células das criptas do intestino delgado de ratos. Demonstrou-se que essas células reproduzem com eficácia as propriedades fisiológicas do epitélio do intestino delgado, particularmente no que diz respeito ao transporte do íon cloreto (Cl⁻). Os canais de cloreto nas células IEC-18 exibem tipos distintos de condutâncias que respondem a vários estímulos, como inchaço celular, aumento do cálcio intracelular (Ca²⁺) e níveis elevados de AMP cíclico (cAMP). Por exemplo, as correntes de Cl⁻ ativadas pelo inchaço nas células IEC-18 são caracterizadas por retificação para fora e independência de tensão. Além disso, as células IEC-18 expressam canais do regulador de condutância transmembranar da fibrose cística (CFTR), evidenciados pela presença de condutância de Cl⁻ ativada por AMP cíclico, que pode ser inibida pela glibenclamida e pelo ácido 5-nitro-2-(3-fenilpropilamino)benzoico (NPPB), mas não é afetada pelo DIDS.

As células IEC-18 também têm sido utilizadas para explorar mecanismos de sobrevivência celular sob estresse induzido pelo desprendimento, conhecido como anoikis. Pesquisas indicam que a prostaglandina E2 (PGE2) pode promover a viabilidade e a agregação celular em células IEC-18 desprendidas por meio de vias de sinalização mediadas pelo AMPc. Essa proteção contra o anoikis está associada à ativação da adenilato ciclase e da proteína quinase A (PKA), aumentando a adesão e a viabilidade celular mesmo em estados de suspensão. Tais descobertas são significativas para a compreensão de processos relacionados à inflamação e possíveis contribuições para a carcinogênese em tecidos intestinais.

Além disso, monocamadas de IEC-18 têm sido empregadas para estudar o transporte de várias moléculas através da barreira intestinal. Em comparação com a linhagem celular Caco-2, as células IEC-18 fornecem um modelo mais preciso para o transporte transcelular e paracelular passivo devido às suas semelhanças estruturais com as células das criptas do intestino delgado. Ao contrário das células Caco-2, que possuem capacidades significativas de transporte ativo, as células IEC-18 demonstram transporte mediado por transportadores mínimo, tornando-as uma opção mais adequada para a análise da permeabilidade passiva de macromoléculas hidrofílicas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.