IEC-18

La linea cellulare IEC-18 è una linea cellulare epiteliale non trasformata derivata dalle cellule della cripta dell'intestino tenue di ratto. È stato dimostrato che queste cellule modellano efficacemente le proprietà fisiologiche dell'epitelio dell'intestino tenue, in particolare per quanto riguarda il trasporto dello ione cloruro (Cl-). I canali del cloruro nelle cellule IEC-18 presentano tipi distinti di conduttanze che rispondono a vari stimoli come il rigonfiamento cellulare, l'aumento del calcio intracellulare (Ca²⁺) e l'aumento dell'AMP ciclico (cAMP). Ad esempio, le correnti di Cl- attivate dal rigonfiamento nelle cellule IEC-18 sono caratterizzate da rettificazione verso l'esterno e indipendenza dal voltaggio. Inoltre, le cellule IEC-18 esprimono canali regolatori della conduttanza transmembrana della fibrosi cistica (CFTR), come dimostra la presenza di conduttanze Cl- attivate da cAMP che possono essere inibite dalla glibenclamide e dall'acido 5-nitro-2-(3-fenilpropilammino) benzoico (NPPB), ma non dalla DIDS.

Le cellule IEC-18 sono state utilizzate anche per esplorare i meccanismi di sopravvivenza cellulare in condizioni di stress indotto dal distacco, noto come anoikis. La ricerca indica che la prostaglandina E2 (PGE2) può promuovere la vitalità e l'aggregazione cellulare nelle cellule IEC-18 distaccate attraverso vie di segnalazione mediate da cAMP. Questa protezione dall'anoikis è associata all'attivazione dell'adenilato ciclasi e della protein chinasi A (PKA), migliorando l'adesione e la vitalità delle cellule anche negli stati di sospensione. Questi risultati sono significativi per la comprensione dei processi legati all'infiammazione e del potenziale contributo alla carcinogenesi nei tessuti intestinali.

Inoltre, i monostrati IEC-18 sono stati impiegati per studiare il trasporto di varie molecole attraverso la barriera intestinale. Rispetto alla linea cellulare Caco-2, le cellule IEC-18 forniscono un modello più accurato per il trasporto passivo transcellulare e paracellulare, grazie alla loro somiglianza strutturale con le cellule della cripta dell'intestino tenue. A differenza delle cellule Caco-2, che possiedono significative capacità di trasporto attivo, le cellule IEC-18 dimostrano un trasporto mediato da un vettore minimo, rendendole una scelta più adatta per analizzare la permeabilità passiva di macromolecole idrofile.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia