HCT116-Luc

HCT 116-Luc, insan kolorektal karsinom hücre hattı HCT 116’nın lusiferaz eksprese eden bir türevidir. Bu hat, Photinus pyralis'ten elde edilen ateşböceği lusiferazını kodlayan bir yapı ile puromisin direnç kaseti (pac) birleştirilerek transdüksiyon yoluyla oluşturulmuştur; dolayısıyla raportör ekspresyonu, yolak bağımlı değil, konstitütiftir. Bu nedenle biyolüminesan sinyal, canlı hücre sayısıyla orantılıdır; bu da modeli, in vivo olarak tümör yükünün non-invaziv izlenmesi ve in vitro olarak hücre canlılığı ile proliferasyonunun hızlı, plaka tabanlı kantifikasyonu için uygun hale getirir.

Ana HCT 116 hattı, DNA uyumsuzluk onarımında eksiklik ile birlikte mikrosatellit instabilitesi, vahşi tip TP53 ve neredeyse diploid bir karyotip dahil olmak üzere, bu türevde de belirleyici özelliklerini korumaktadır. Mutasyonel arka planı, KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, β-katenini stabilize eden ve konstitütif Wnt sinyalini tetikleyen heterozigot CTNNB1 p.Ser45del ve MSI kolorektal tümörlere özgü TGFBR2 ve ACVR2A'daki homozigot çerçeve kayması mutasyonlarından oluşur. CDKN2A, EP300, BRCA2 ve PPM1D genlerinde de ek varyantlar mevcuttur. Raporlayıcının stabil entegrasyonu, aynı hayvanda ortotopik ve subkutan ksenograftların uzun süreli görüntülenmesine olanak tanır; bu da kohort boyutlarını azaltır ve her zaman noktasında terminal sonlanım noktalarına olan ihtiyacı ortadan kaldırır. Rutin çoğaltma sırasında transgeni korumak için puromisin seleksiyonu kullanılır.

Bu hücre hattı, preklinik onkolojide, sitotoksik ve hedefe yönelik ajanların etkinlik çalışmalarında, metastaz ve tümör hedefleme modellerinde ve lüminesan okumanın kolorimetrik testlere göre daha geniş bir dinamik aralık sunduğu yüksek verimli sitotoksisite taramalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Lüseraz ekspresyonu indüklenebilir kontrol altında olmadığından, sinyal belirli bir yolakın aktivitesinden ziyade hücre sayısını ve metabolik durumu yansıtır; bu nedenle, ATP düzeylerini veya hücresel metabolizmayı değiştiren bileşikler, hücre ölümünden bağımsız olarak lüminesansı etkileyebilir. Doğrulama amacıyla ortogonal canlılık testleri önerilir; ayrıca, DNA’ya zarar veren ajanlara ve immünomodülatör tedavilere verilen yanıtlar yorumlanırken, HCT 116 hücrelerinin mismatch onarım eksikliği olan arka planı dikkate alınmalıdır.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın