HCT116-Luc

HCT 116-Luc es un derivado de la línea celular de carcinoma colorrectal humano HCT 116 que expresa luciferasa. La línea se generó mediante transducción con un constructo que codifica la luciferasa de la luciérnaga Photinus pyralis junto con un casete de resistencia a la puromicina (pac), por lo que la expresión del reportero es constitutiva y no depende de ninguna vía señalizadora. Por lo tanto, la señal bioluminiscente es proporcional al número de células viables, lo que hace que el modelo sea adecuado para el seguimiento no invasivo de la carga tumoral in vivo y para la cuantificación rápida, en placa, de la viabilidad y la proliferación celular in vitro.

La línea parental HCT 116 conserva sus características definitorias en este derivado, entre ellas la inestabilidad de microsatélites con reparación deficiente de desajustes de ADN, TP53 de tipo salvaje y un cariotipo casi diploide. Su fondo mutacional comprende KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, una deleción heterocigótica en CTNNB1 p.Ser45del que estabiliza la β-catenina e induce una señalización Wnt constitutiva, y mutaciones homocigóticas con desplazamiento del marco de lectura en TGFBR2 y ACVR2A, típicas de los tumores colorrectales con MSI. Existen variantes adicionales en CDKN2A, EP300, BRCA2 y PPM1D. La integración estable del reportero permite la obtención de imágenes longitudinales de xenoinjertos ortotópicos y subcutáneos en el mismo animal, lo que reduce el tamaño de las cohortes y elimina la necesidad de criterios de valoración finales en cada punto temporal. Se utiliza la selección con puromicina para mantener el transgén durante la expansión rutinaria.

Esta línea se aplica ampliamente en oncología preclínica, en estudios de eficacia de agentes citotóxicos y dirigidos, en modelos de metástasis y de migración tumoral, y en cribados de citotoxicidad de alto rendimiento, donde una lectura luminiscente ofrece un rango dinámico más amplio que los ensayos colorimétricos. Dado que la expresión de la luciferasa no está bajo control inducible, la señal refleja el número de células y el estado metabólico, más que la actividad de una vía específica; por lo tanto, los compuestos que alteran los niveles de ATP o el metabolismo celular pueden afectar a la luminiscencia independientemente de la muerte celular. Se recomienda realizar ensayos ortogonales de viabilidad para la confirmación, y debe tenerse en cuenta la deficiencia en la reparación de desajustes de la línea celular HCT 116 a la hora de interpretar las respuestas a agentes que dañan el ADN y a tratamientos inmunomoduladores.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía