HCT116-Luc

HCT 116-Luc er et luciferase-uttrykkende derivat av den humane kolorektale karsinomcellelinjen HCT 116. Linjen ble generert ved transduksjon med et konstrukt som koder for ildflue-luciferase fra Photinus pyralis sammen med en puromycinresistenskassett (pac), slik at reporteruttrykket er konstitutivt snarere enn signalveiavhengig. Det bioluminescerende signalet er derfor proporsjonalt med antall levedyktige celler, noe som gjør modellen egnet for ikke-invasiv sporing av tumorbyrden in vivo og for rask, platebasert kvantifisering av cellelevedyktighet og -proliferasjon in vitro.

Den opprinnelige HCT 116-linjen beholder sine karakteristiske trekk i dette derivatet, inkludert mikrosatellittinstabilitet med mangelfull DNA-mismatch-reparasjon, villtype TP53 og en nesten diploid karyotype. Dens mutasjonsbakgrunn omfatter KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, en heterozygot CTNNB1 p.Ser45del som stabiliserer β-katenin og driver konstitutiv Wnt-signalering, samt homozygote rammeskiftmutasjoner i TGFBR2 og ACVR2A, som er typiske for MSI-kolorektale svulster. Ytterligere varianter finnes i CDKN2A, EP300, BRCA2 og PPM1D. Stabil integrering av reportergenet muliggjør longitudinell avbildning av ortotopiske og subkutane xenotransplantater i samme dyr, noe som reduserer kohortstørrelsene og eliminerer behovet for terminale endepunkter ved hvert tidspunkt. Puromycin-seleksjon brukes til å opprettholde transgenet under rutinemessig ekspansjon.

Denne linjen brukes mye i preklinisk onkologi, i effektstudier av cytotoksiske og målrettede midler, i modeller for metastase og tumørhoming, samt i cytotoksisitetsscreening med høy gjennomstrømning der en luminescerende avlesning gir et bredere dynamisk område enn kolorimetriske analyser. Siden luciferase-ekspresjonen ikke er under inducerbar kontroll, indikerer signalet antall celler og metabolsk tilstand snarere enn aktiviteten i en spesifikk signalvei, slik at forbindelser som endrer ATP-nivåer eller cellulær metabolisme kan påvirke luminescensen uavhengig av celledrap. Ortogonale levedyktighetsanalyser anbefales for bekreftelse, og HCT 116s bakgrunn med mangelfull mismatch-reparasjon bør tas i betraktning ved tolkning av responser på DNA-skadende midler og immunmodulerende behandlinger.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring