HCT116-Luc

HCT 116-Lucは、ヒト結腸直腸癌細胞株HCT 116のルシフェラーゼ発現誘導株である。 この細胞株は、Photinus pyralis由来のホタルルシフェラーゼをコードする構築体と、プテロマイシン耐性カセット（pac）を組み込んだベクターによる形質導入によって作製されたため、レポーターの発現は経路依存的ではなく、恒常的である。 したがって、生物発光シグナルは生存細胞数に比例するため、このモデルは、生体内の腫瘍負荷を非侵襲的に追跡したり、in vitro で細胞の生存率や増殖をプレートを用いて迅速に定量したりするのに適しています。

親株である HCT 116 株は、この派生株においても、DNA ミスマッチ修復機能の欠損を伴うマイクロサテライト不安定性、野生型 TP53、およびほぼ二倍体の核型など、その特徴的な性質を保持している。その変異背景には、KRAS p.Gly13Asp、 PIK3CA p.His1047Arg、β-カテニンを安定化させ恒常的なWntシグナル伝達を誘導するヘテロ接合型CTNNB1 p.Ser45del、およびMSI大腸がんに典型的なTGFBR2およびACVR2Aのホモ接合型フレームシフト変異が含まれる。 さらに、CDKN2A、EP300、BRCA2、およびPPM1Dにも変異が認められる。レポーター遺伝子の安定的な組み込みにより、同一の動物において同所性および皮下異種移植片の経時的イメージングが可能となり、コホート規模を縮小し、各時点での終点評価の必要性を排除できる。 ルーチンでの増殖中は、プロマイシンによる選別を用いてトランスジーンを維持している。

この細胞株は、前臨床腫瘍学、細胞毒性薬剤および標的薬剤の有効性試験、転移および腫瘍ホーミングモデル、ならびに発光測定が比色測定法よりも広いダイナミックレンジを提供するハイスループット細胞毒性スクリーニングで広く応用されています。 ルシフェラーゼの発現は誘導性制御下にはないため、このシグナルは特定の経路の活性ではなく、細胞数や代謝状態を反映しています。そのため、ATP レベルや細胞代謝を変化させる化合物は、細胞死とは無関係に発光に影響を与える可能性があります。 確認のためには直交的な生存率アッセイが推奨され、DNA損傷剤や免疫調節療法に対する反応を解釈する際には、HCT 116 のミスマッチ修復欠損という背景を考慮する必要があります。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。