HCT116-Luc

HCT 116-Luc adalah turunan dari garis sel karsinoma kolorektal manusia HCT 116 yang mengekspresikan luciferase. Garis sel ini dihasilkan melalui transduksi dengan konstruksi yang mengkodekan luciferase kunang-kunang dari Photinus pyralis bersama dengan kaset resistensi puromisin (pac), sehingga ekspresi reporter bersifat konstitutif dan bukan bergantung pada jalur tertentu. Oleh karena itu, sinyal bioluminesensi sebanding dengan jumlah sel yang masih hidup, yang menjadikan model ini cocok untuk pelacakan beban tumor secara non-invasif in vivo serta untuk kuantifikasi cepat viabilitas dan proliferasi sel secara in vitro menggunakan pelat.

Baris induk HCT 116 mempertahankan ciri-cirinya yang khas dalam turunan ini, termasuk ketidakstabilan mikrosatelit dengan defisiensi perbaikan ketidaksesuaian DNA, TP53 tipe liar, dan kariotipe yang mendekati diploid. Latar belakang mutasinya terdiri dari KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, mutasi heterozigot CTNNB1 p.Ser45del yang menstabilkan β-catenin dan mendorong sinyal Wnt konstitutif, serta mutasi frameshift homozigot pada TGFBR2 dan ACVR2A yang khas pada tumor kolorektal MSI. Varian tambahan terdapat pada gen CDKN2A, EP300, BRCA2, dan PPM1D. Integrasi stabil reporter ini memungkinkan pencitraan longitudinal pada xenograft ortotopik dan subkutan pada hewan yang sama, sehingga mengurangi ukuran kohort dan menghilangkan kebutuhan akan titik akhir (terminal endpoint) pada setiap titik waktu. Seleksi puromisin digunakan untuk mempertahankan transgen selama ekspansi rutin.

Garis sel ini banyak diterapkan dalam onkologi praklinis, dalam studi kemanjuran agen sitotoksik dan bertarget, dalam model metastasis dan homing tumor, serta dalam skrining sitotoksisitas berkapasitas tinggi di mana pembacaan luminesen menawarkan rentang dinamis yang lebih luas daripada uji kolorimetrik. Karena ekspresi luciferase tidak berada di bawah kendali induksi, sinyal tersebut melaporkan jumlah sel dan status metabolik, bukan aktivitas jalur tertentu; sehingga senyawa yang mengubah tingkat ATP atau metabolisme seluler dapat memengaruhi luminesensi secara independen dari pembunuhan sel. Uji viabilitas ortogonal direkomendasikan untuk konfirmasi, dan latar belakang defisiensi perbaikan ketidakcocokan (mismatch repair) pada HCT 116 harus dipertimbangkan saat menafsirkan respons terhadap agen perusak DNA dan pengobatan imunomodulator.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami