HCT116-Luc

A HCT 116-Luc é um derivado da linha celular de carcinoma colorretal humano HCT 116 que expressa luciferase. A linha foi gerada por transdução com uma construção que codifica a luciferase do pirilampo Photinus pyralis, juntamente com uma cassete de resistência à puromicina (pac), pelo que a expressão do repórter é constitutiva e não depende de vias metabólicas. O sinal bioluminescente é, portanto, proporcional ao número de células viáveis, o que torna o modelo adequado para o acompanhamento não invasivo da carga tumoral in vivo e para a quantificação rápida, em placas, da viabilidade e proliferação celular in vitro.

A linha parental HCT 116 mantém as suas características definidoras nesta derivada, incluindo instabilidade de microssatélites com reparação deficiente de desajustes de ADN, TP53 de tipo selvagem e um cariótipo quase diploide. O seu pano de fundo mutacional compreende KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, um CTNNB1 p.Ser45del heterozigótico que estabiliza a β-catenina e induz a sinalização Wnt constitutiva, e mutações homozigóticas com deslocamento do quadro de leitura em TGFBR2 e ACVR2A, típicas de tumores colorretais com MSI. Estão presentes variantes adicionais em CDKN2A, EP300, BRCA2 e PPM1D. A integração estável do repórter permite a imagiologia longitudinal de xenoenxertos ortotópicos e subcutâneos no mesmo animal, reduzindo a dimensão das coortes e eliminando a necessidade de parâmetros finais em cada ponto temporal. A seleção com puromicina é utilizada para manter o transgene durante a expansão de rotina.

Esta linha é amplamente aplicada na oncologia pré-clínica, em estudos de eficácia de agentes citotóxicos e direcionados, em modelos de metástase e de homing tumoral, e no rastreio de citotoxicidade de alto rendimento, onde uma leitura luminescente oferece uma gama dinâmica mais ampla do que os ensaios colorimétricos. Como a expressão da luciferase não está sob controlo induzível, o sinal reflete o número de células e o estado metabólico, em vez da atividade de uma via específica; por isso, os compostos que alteram os níveis de ATP ou o metabolismo celular podem afetar a luminescência independentemente da morte celular. Recomenda-se a realização de ensaios de viabilidade ortogonais para confirmação, e o contexto de deficiência na reparação de desajustes da linha celular HCT 116 deve ser tido em conta na interpretação das respostas a agentes que causam danos no ADN e a tratamentos imunomoduladores.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia