HCT116-Luc

HCT 116-Luc je derivat človeške celične linije kolorektalnega karcinoma HCT 116, ki izraža luciferazo. Linija je bila ustvarjena s transdukcijo s konstruktom, ki kodira luciferazo svetlečega hrošča Photinus pyralis skupaj s kaseto za odpornost proti puromicinu (pac), zato je ekspresija reporterja konstitutivna in ne odvisna od signalne poti. Bioluminiscenčni signal je zato sorazmeren s številom živih celic, zaradi česar je model primeren za neinvazivno spremljanje obremenitve z rakom in vivo ter za hitro kvantifikacijo celične vitalnosti in proliferacije in vitro na ploščah.

Izvorna linija HCT 116 v tem derivatu ohranja svoje značilne lastnosti, vključno z nestabilnostjo mikrosatelitov s pomanjkljivim popravljanjem neskladij v DNK, divjim tipom TP53 in skoraj diploidnim kariotipom. Njeno mutacijsko ozadje obsega KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, heterozigotno delecijo CTNNB1 p.Ser45del, ki stabilizira β-katenin in spodbuja konstitutivno Wnt-signalizacijo, ter homozigotne mutacije s premikom branja v genih TGFBR2 in ACVR2A, značilne za MSI-kolorektalne tumorje. Dodatne variante so prisotne v genih CDKN2A, EP300, BRCA2 in PPM1D. Stabilna integracija reporterja omogoča longitudinalno slikanje ortotopnih in podkožnih ksenotransplantatov pri isti živali, kar zmanjša velikost kohort in odpravlja potrebo po končnih merilih v vsakem časovnem trenutku. Za ohranjanje transgena med rutinsko ekspanzijo se uporablja selekcija s puromicinom.

Ta linija se široko uporablja v predklinični onkologiji, v študijah učinkovitosti citotoksičnih in ciljno usmerjenih zdravil, v modelih metastaziranja in usmerjanja v tumor ter pri presejanju citotoksičnosti z visoko zmogljivostjo, kjer luminescenčni odčitek ponuja širši dinamični razpon kot kolorimetrični testi. Ker izražanje luciferaze ni pod inducibilnim nadzorom, signal prikazuje število celic in presnovno stanje, ne pa aktivnosti določene poti, zato lahko spojine, ki spreminjajo ravni ATP ali celični metabolizem, vplivajo na luminescenco neodvisno od uničevanja celic. Za potrditev se priporočajo ortogonalni testi vitalnosti, pri razlagi odzivov na sredstva, ki poškodujejo DNK, in imunomodulatorna zdravljenja pa je treba upoštevati pomanjkanje popravljanja neskladij v ozadju celic HCT 116.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo