HCT116-Luc

HCT 116-Luc är en luciferasuttryckande variant av den humana kolorektala karcinomcellinjen HCT 116. Cellinjen genererades genom transduktion med en konstrukt som kodar för eldfluga-luciferas från Photinus pyralis tillsammans med en puromycinresistenskassett (pac), vilket innebär att reporteruttrycket är konstitutivt snarare än signalvägsberoende. Den bioluminescerande signalen är därför proportionell mot antalet livsdugliga celler, vilket gör modellen lämplig för icke-invasiv spårning av tumörbördan in vivo och för snabb, plattbaserad kvantifiering av cellernas livsduglighet och proliferation in vitro.

Den ursprungliga HCT 116-linjen behåller sina utmärkande egenskaper i denna derivatlinje, inklusive mikrosatellitinstabilitet med bristfällig DNA-mismatch-reparation, vildtyp TP53 och en nästan diploid karyotyp. Dess mutationsbakgrund omfattar KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, en heterozygot CTNNB1 p.Ser45del som stabiliserar β-katenin och driver konstitutiv Wnt-signalering, samt homozygota frameshift-mutationer i TGFBR2 och ACVR2A som är typiska för MSI-kolorektala tumörer. Ytterligare varianter förekommer i CDKN2A, EP300, BRCA2 och PPM1D. Stabil integration av reportergenen möjliggör longitudinell avbildning av ortotopiska och subkutana xenotransplantat hos samma djur, vilket minskar kohortstorlekarna och eliminerar behovet av terminala slutpunkter vid varje tidpunkt. Puromycin-selektion används för att bibehålla transgenen under rutinmässig expansion.

Denna cellinje används i stor utsträckning inom preklinisk onkologi, i effektstudier av cytotoxiska och målinriktade läkemedel, i modeller för metastasering och tumörhoming samt vid cytotoxicitetsscreening med hög genomströmning där en luminescerande avläsning erbjuder ett bredare dynamiskt omfång än kolorimetriska analyser. Eftersom luciferasuttrycket inte styrs inducerbart, återspeglar signalen cellantalet och det metaboliska tillståndet snarare än aktiviteten i en specifik signalväg, vilket innebär att föreningar som förändrar ATP-nivåerna eller den cellulära metabolismen kan påverka luminescensen oberoende av celldöd. Orthogonala livskraftsanalyser rekommenderas för bekräftelse, och den bakgrund av bristande mismatch-reparation som kännetecknar HCT 116 bör beaktas vid tolkningen av responser på DNA-skadande ämnen och immunmodulerande behandlingar.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring