HCT116-Luc

HCT 116-Luc은 인간 대장암 세포주 HCT 116에서 유래한 루시페라아제를 발현하는 파생 세포주입니다. 이 세포주는 Photinus pyralis의 반딧불 루시페라제를 암호화하는 구축체와 푸로마이신 저항성 카세트(pac)를 함께 도입하여 생성되었으므로, 리포터 발현은 신호 전달 경로에 의존하지 않고 지속적으로 이루어집니다. 따라서 생물발광 신호는 생존 세포 수에 비례하므로, 이 모델은 생체 내에서 종양 부하를 비침습적으로 추적하고, 시험관 내에서 세포 생존율 및 증식을 플레이트를 이용하여 신속하게 정량화하는 데 적합합니다.

모계 HCT 116 계통은 DNA 미스매치 복구 결핍을 동반한 마이크로위성 불안정성, 야생형 TP53, 거의 이배체에 가까운 핵형 등 고유한 특징을 이 파생 계통에서도 유지하고 있습니다. 이 계통의 돌연변이 배경은 KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, β-카테닌을 안정화시키고 상시적인 Wnt 신호전달을 유도하는 이형접합 CTNNB1 p.Ser45del, 그리고 MSI 대장암에서 전형적으로 나타나는 TGFBR2 및 ACVR2A의 동형접합 프레임시프트 돌연변이로 구성됩니다. 그 외에도 CDKN2A, EP300, BRCA2 및 PPM1D 유전자에서 추가적인 변이가 관찰된다. 리포터의 안정적인 통합을 통해 동일한 동물 내에서 동종 이식편 및 피하 이식편의 종단적 영상 촬영이 가능해져, 코호트 규모를 줄이고 각 시점에서 최종 평가 지표를 확인할 필요가 없어진다. 루틴 증식 과정에서 트랜스유전자를 유지하기 위해 푸로마이신 선별이 사용됩니다.

이 계통은 전임상 종양학, 세포독성 및 표적 치료제의 효능 연구, 전이 및 종양 호밍 모델, 그리고 발광 측정법이 비색 분석법보다 더 넓은 동적 범위를 제공하는 고처리량 세포독성 스크리닝에 널리 적용됩니다. 루시페라제 발현은 유도 가능한 조절을 받지 않기 때문에, 이 신호는 특정 경로의 활성보다는 세포 수와 대사 상태를 나타내므로, ATP 수준이나 세포 대사를 변화시키는 화합물은 세포 사멸과 무관하게 발광에 영향을 미칠 수 있습니다. 확인을 위해서는 직교적 생존력 분석법을 사용할 것을 권장하며, DNA 손상제 및 면역 조절 치료에 대한 반응을 해석할 때는 HCT 116 세포주의 미스매치 복구 결핍 배경을 고려해야 합니다.

37°C, 5%_CO2, 습한 대기.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

싸이티온은 제품의 품질과 생존력을 보증합니다. 당사는 당사 시설에서 배송된 후 60일 동안 배양 시작 시 세포가 생존할 수 있음을 보증합니다. 당사는 모든 재료가 분석 증명서 및/또는 제품 시트에 설명된 사양을 준수함을 보증합니다

자세한 내용은 <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">보증서 를 참조하시기 바랍니다