HCT116-Luc

HCT 116-Luc is een luciferase-expresserende afgeleide van de menselijke colorectale carcinoomcellijn HCT 116. De lijn is gegenereerd door transductie met een construct dat codeert voor vuurvlieg-luciferase van Photinus pyralis, samen met een puromycine-resistentiecassette (pac), waardoor de reporter-expressie constitutief is in plaats van pathway-afhankelijk. Het bioluminescente signaal is daarom evenredig aan het aantal levensvatbare cellen, waardoor het model geschikt is voor het niet-invasief volgen van de tumorbelasting in vivo en voor snelle, op kweekplaten gebaseerde kwantificering van de levensvatbaarheid en proliferatie van cellen in vitro.

De oorspronkelijke HCT 116-lijn behoudt haar kenmerkende eigenschappen in deze afgeleide lijn, waaronder microsatellietinstabiliteit met een deficiënt DNA-mismatch-reparatiesysteem, wildtype TP53 en een bijna-diploïde karyotype. De mutatieachtergrond omvat KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, een heterozygote CTNNB1 p.Ser45del die β-catenine stabiliseert en constitutieve Wnt-signalering stimuleert, en homozygote frameshift-mutaties in TGFBR2 en ACVR2A die kenmerkend zijn voor MSI-colorectale tumoren. Er zijn aanvullende varianten aanwezig in CDKN2A, EP300, BRCA2 en PPM1D. De stabiele integratie van de reporter maakt longitudinale beeldvorming mogelijk van orthotope en subcutane xenotransplantaten in hetzelfde dier, waardoor de omvang van de cohorten wordt verkleind en de noodzaak van terminale eindpunten op elk tijdstip wordt weggenomen. Puromycineselectie wordt gebruikt om het transgen tijdens routinematige expansie in stand te houden.

Deze lijn wordt op grote schaal toegepast in de preklinische oncologie, in werkzaamheidsstudies van cytotoxische en gerichte middelen, in metastase- en tumorgemikte modellen, en bij high-throughput cytotoxiciteitsscreening, waarbij een luminescente uitlezing een breder dynamisch bereik biedt dan colorimetrische assays. Omdat de expressie van luciferase niet onder induceerbare controle staat, geeft het signaal het aantal cellen en de metabolische toestand weer in plaats van de activiteit van een specifiek signaalpad; daarom kunnen verbindingen die de ATP-niveaus of het cellulaire metabolisme beïnvloeden de luminescentie beïnvloeden, onafhankelijk van celdoding. Orthogonale levensvatbaarheidstesten worden aanbevolen ter bevestiging, en bij de interpretatie van reacties op DNA-beschadigende middelen en immunomodulerende behandelingen moet rekening worden gehouden met de achtergrond van HCT 116, die een tekort aan mismatch-reparatie vertoont.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring