HCT116-Luc

HCT 116-Luc е производна на човешката клетъчна линия HCT 116 за колоректален карцином, която експресира луцифераза. Линията е създадена чрез трансдукция с конструкция, кодираща луцифераза от светулка (Photinus pyralis), заедно с касета за резистентност към пуромицин (pac), така че експресията на репортера е конститутивна, а не зависима от метаболитен път. Следователно биолуминесцентният сигнал е пропорционален на броя на жизнеспособните клетки, което прави модела подходящ за неинвазивно проследяване на туморното натоварване in vivo и за бързо количествено определяне на клетъчната жизнеспособност и пролиферация in vitro чрез култивиране в плаки.

Родителската линия HCT 116 запазва своите характерни черти в този дериват, включително микросателитна нестабилност с дефицит на репарация на ДНК-несъответствия, TP53 от див тип и почти диплоиден кариотип. Мутационният ѝ фон включва KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, хетерозиготна мутация CTNNB1 p.Ser45del, която стабилизира β-катенина и стимулира конститутивно Wnt-сигнализиране, както и хомозиготни мутации с промяна на рамката в TGFBR2 и ACVR2A, типични за MSI колоректални тумори. Налице са допълнителни варианти в CDKN2A, EP300, BRCA2 и PPM1D. Стабилната интеграция на репортера позволява проследяване във времето на ортотопични и подкожни ксенографти при едно и също животно, което намалява размера на кохортите и премахва необходимостта от терминални крайни точки във всеки момент. За поддържане на трансгена по време на рутинното размножаване се използва селекция с пуромицин.

Тази линия се прилага широко в предклиничната онкология, в проучвания за ефикасност на цитотоксични и целеви агенти, в модели на метастазиране и насочване към тумора, както и в скрининг за цитотоксичност с висока производителност, където луминесцентните измервания предлагат по-широк динамичен диапазон в сравнение с колориметричните тестове. Тъй като експресията на луциферазата не се контролира чрез индукция, сигналът отразява броя на клетките и метаболитното състояние, а не активността на конкретен метаболитен път, така че съединенията, които променят нивата на АТФ или клетъчния метаболизъм, могат да повлияят на луминесценцията независимо от унищожаването на клетките. За потвърждение се препоръчват ортогонални тестове за жизнеспособност, а при интерпретирането на реакциите към агенти, увреждащи ДНК, и имуномодулиращи терапии трябва да се вземе предвид дефицитът на репарация на несъответствия в HCT 116.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация