HCT116-Luc

HCT 116-Luc on ihmisen paksusuolisyöpäsolulinjan HCT 116:n johdannainen, joka ilmentää lusiferaasia. Linja tuotettiin transduktiolla, jossa käytettiin Photinus pyralis -lajin tulikärpäsen lusiferaasia koodaavaa konstruktia yhdessä puromysiiniresistenssikassetin (pac) kanssa, joten raportointigeenin ilmentyminen on konstitutiivista eikä reitistä riippuvaa. Bioluminesenssisignaali on siten verrannollinen elävien solujen lukumäärään, minkä ansiosta malli soveltuu kasvaimen kuormituksen ei-invasiiviseen seurantaan in vivo sekä solujen elinkelpoisuuden ja proliferaation nopeaan, maljalla tehtävään kvantifiointiin in vitro.

Alkuperäinen HCT 116 -linja säilyttää tässä johdannaisessa sen tunnusomaiset piirteet, mukaan lukien mikrosatelliittien epävakaus ja puutteellinen DNA:n virhekorjaus, villityypin TP53 sekä lähes diploidinen karyotyyppi. Sen mutaatiotausta koostuu KRAS p.Gly13Asp:sta, PIK3CA p.His1047Arg, heterotsygoottinen CTNNB1 p.Ser45del -mutaatio, joka stabiloi β-kateniinin ja ajaa konstitutiivista Wnt-signalointia, sekä TGFBR2- ja ACVR2A-geeneissä esiintyvät homotsygoottiset frameshift-mutaatiot, jotka ovat tyypillisiä MSI-kolorektaalisille kasvaimille. Lisävariantteja esiintyy geeneissä CDKN2A, EP300, BRCA2 ja PPM1D. Raportoijan vakaa integraatio mahdollistaa ortotopisten ja subkutaanisten ksenotransplantaattien pitkittäiskuvantamisen samassa eläimessä, mikä pienentää kohorttikokoja ja poistaa tarpeen määrittää lopullisia päätepisteitä jokaisessa aikapisteessä. Puromysiiniselektiota käytetään transgeenin ylläpitämiseen rutiinisen laajennuksen aikana.

Tätä linjaa käytetään laajalti prekliinisessä onkologiassa, sytotoksisten ja kohdennettujen lääkeaineiden tehotutkimuksissa, etäpesäke- ja kasvaimen homing-malleissa sekä suurikapasiteettisessa sytotoksisuusseulonnassa, jossa luminesenssimittaus tarjoaa laajemman dynaamisen alueen kuin kolorimetriset määritykset. Koska lusiferaasin ilmentymistä ei voida säätää induktiivisesti, signaali kertoo solujen lukumäärästä ja metabolisesta tilasta pikemminkin kuin tietyn reitin aktiivisuudesta, joten yhdisteet, jotka muuttavat ATP-tasoja tai solujen aineenvaihduntaa, voivat vaikuttaa luminesenssiin riippumatta solujen tuhoamisesta. Vahvistusta varten suositellaan ortogonaalisia elinkykyanalyysejä, ja HCT 116 -solulinjan puutteellista mismatch-korjauskykyä tulisi ottaa huomioon tulkittaessa vasteita DNA:ta vaurioittaviin aineisiin ja immunomoduloiviin hoitoihin.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa