HCT116-Luc

HCT 116-Luc on inimese kolorektaalse kartsinoomi rakuliini HCT 116 lucifereesi ekspresseeriv derivaat. Liin loodi transduktsiooni teel, kasutades konstrukti, mis kodeerib Photinus pyralis'e särakirbu lusiferase'i koos puromütsiiniresistentsuskassetiga (pac), mistõttu reportergeeni ekspressioon on konstitutiivne, mitte signaaliteest sõltuv. Seetõttu on bioluminestsentssignaal proportsionaalne eluvõimeliste rakkude arvuga, mis muudab selle mudeli sobivaks kasvajakoormuse mitteinvasiivseks jälgimiseks in vivo ning rakkude eluvõimelisuse ja proliferatsiooni kiireks, plaadil põhinevaks kvantifitseerimiseks in vitro.

Emaliin HCT 116 säilitab selles derivaadis oma iseloomulikud tunnused, sealhulgas mikrosatelliitide ebastabiilsuse koos puuduliku DNA-mismatch-parandusega, loodusliku tüüpi TP53 ja peaaegu diploidse kariotüübi. Selle mutatsioonitaust hõlmab KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, heterosügootne CTNNB1 p.Ser45del, mis stabiliseerib β-kateniini ja soodustab konstitutiivset Wnt-signaalimist, ning TGFBR2 ja ACVR2A homosügootsed raamimuutused, mis on iseloomulikud MSI-kolorektaaltuumoritele. Lisavariandid esinevad geenides CDKN2A, EP300, BRCA2 ja PPM1D. Reportergeeni stabiilne integreerimine võimaldab ortotopiliste ja subkutaansete ksenotransplantaatide pikaajalist pildistamist samal loomal, vähendades uuringurühma suurust ja kõrvaldades vajaduse lõpp-endpunktide järele igal ajamomendil. Transgeeni säilitamiseks rutiinse paljundamise ajal kasutatakse puromütsiini selektsiooni.

Seda liini kasutatakse laialdaselt prekliinilises onkoloogias, tsütotoksiliste ja sihtotstarbeliste ravimite efektiivsuse uuringutes, metastaasi- ja kasvajasse suundumise mudelites ning suure läbilaskevõimega tsütotoksilisuse sõelumisel, kus luminestsentsmõõtmine pakub laiemat dünaamilist ulatust kui kolorimeetrilised analüüsid. Kuna lusiferase ekspressiooni ei reguleerita induktsiooni teel, näitab signaal pigem rakkude arvu ja ainevahetuse seisundit kui konkreetse signaalitee aktiivsust, mistõttu võivad ühendid, mis muudavad ATP taset või raku ainevahetust, mõjutada luminestsentsi sõltumata rakkude hävitamisest. Kinnitamiseks soovitatakse kasutada ortogonaalseid eluvõimelisuse analüüse ning DNA-d kahjustavate ravimite ja immunomoduleerivate ravimeetodite suhtes saadud vastuseid tõlgendades tuleks arvesse võtta HCT 116 rakkude taustal esinevat mismatch-paranduse defitsiiti.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest