HCT116-Luc

HCT 116-Luc je derivát ľudskej bunkovej línie kolorektálneho karcinómu HCT 116, ktorý exprimuje luciferázu. Táto línia bola vytvorená transdukciou pomocou konštruktu kódujúceho luciferázu svätojánskej mušky Photinus pyralis spolu s kazetou rezistencie na puromycín (pac), takže expresia reportéra je konštitutívna a nie závislá na signálnej dráhe. Bioluminiscenčný signál je preto úmerný počtu životaschopných buniek, vďaka čomu je tento model vhodný na neinvazívne sledovanie nádorovej záťaže in vivo a na rýchlu kvantifikáciu životaschopnosti a proliferácie buniek in vitro pomocou kultivačných platní.

Rodičovská línia HCT 116 si v tomto deriváte zachováva svoje charakteristické črty, vrátane mikrosatelitnej nestability s deficitom opravy nesúladu DNA, divokého typu TP53 a takmer diploidného karyotypu. Jej mutačné pozadie zahŕňa KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, heterozygotnú mutáciu CTNNB1 p.Ser45del, ktorá stabilizuje β-katenín a riadi konštitutívnu Wnt signalizáciu, a homozygotné frameshiftové mutácie v génoch TGFBR2 a ACVR2A, typické pre kolorektálne nádory s MSI. Ďalšie varianty sa vyskytujú v génoch CDKN2A, EP300, BRCA2 a PPM1D. Stabilná integrácia reportéra umožňuje longitudinálne zobrazovanie ortotopických a subkutánnych xenotransplantátov u toho istého zvieraťa, čím sa znižuje veľkosť kohorty a odstraňuje potreba terminálnych koncových bodov v každom časovom bode. Na udržanie transgénu počas rutinného rozmnožovania sa používa selekcia puromycínom.

Táto línia sa široko využíva v predklinickej onkológii, v štúdiách účinnosti cytotoxických a cielených liečiv, v modeloch metastázovania a homingu nádorov, ako aj pri vysokokapacitnom skríningu cytotoxicity, kde luminiscenčné meranie ponúka širší dynamický rozsah než kolorimetrické testy. Keďže expresia luciferázy nie je pod indukovateľnou kontrolou, signál informuje skôr o počte buniek a metabolickom stave než o aktivite špecifickej dráhy, takže zlúčeniny, ktoré menia hladiny ATP alebo bunkový metabolizmus, môžu ovplyvniť luminiscenciu nezávisle od usmrcovania buniek. Na potvrdenie sa odporúčajú ortogonálne testy životaschopnosti a pri interpretácii reakcií na látky poškodzujúce DNA a imunomodulačné liečby by sa malo zohľadniť pozadie defektu opravy nesúladu v bunke HCT 116.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke