HCT116-Luc

HCT 116-Luc è un derivato della linea cellulare HCT 116, derivata dal carcinoma colorettale umano, che esprime la luciferasi. La linea è stata generata mediante trasduzione con un costrutto che codifica la luciferasi di lucciola proveniente da Photinus pyralis insieme a una cassetta di resistenza alla puromicina (pac), pertanto l’espressione del reporter è costitutiva piuttosto che dipendente dalla via di segnalazione. Il segnale bioluminescente è quindi proporzionale al numero di cellule vitali, il che rende il modello adatto al monitoraggio non invasivo del carico tumorale in vivo e alla quantificazione rapida, su piastra, della vitalità e della proliferazione cellulare in vitro.

La linea parentale HCT 116 conserva le sue caratteristiche distintive in questo derivato, tra cui l’instabilità dei microsatelliti con riparazione del mismatch del DNA carente, TP53 wild-type e un cariotipo quasi diploide. Il suo background mutazionale comprende KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, un CTNNB1 p.Ser45del eterozigote che stabilizza la β-catenina e stimola la segnalazione Wnt costitutiva, nonché mutazioni omozigoti con spostamento del quadro di lettura in TGFBR2 e ACVR2A, tipiche dei tumori colorettali con MSI. Sono presenti ulteriori varianti in CDKN2A, EP300, BRCA2 e PPM1D. L’integrazione stabile del reporter consente l’imaging longitudinale di xenotrapianti ortotopici e sottocutanei nello stesso animale, riducendo le dimensioni delle coorti ed eliminando la necessità di endpoint terminali in ciascun punto temporale. La selezione con puromicina viene utilizzata per mantenere il transgene durante l’espansione di routine.

Questa linea è ampiamente utilizzata nell’oncologia preclinica, negli studi di efficacia di agenti citotossici e mirati, nei modelli di metastasi e di homing tumorale, nonché nello screening di citotossicità ad alta produttività, dove una lettura luminescente offre un intervallo dinamico più ampio rispetto ai test colorimetrici. Poiché l’espressione della luciferasi non è sotto controllo inducibile, il segnale riflette il numero di cellule e lo stato metabolico piuttosto che l’attività di una via specifica; pertanto, i composti che alterano i livelli di ATP o il metabolismo cellulare possono influenzare la luminescenza indipendentemente dalla lisi cellulare. Si raccomandano saggi ortogonali di vitalità per la conferma, e si dovrebbe tenere conto del background di deficit nella riparazione dei mismatch della linea cellulare HCT 116 nell’interpretazione delle risposte agli agenti che danneggiano il DNA e ai trattamenti immunomodulatori.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia