HCT116-Luc

HCT 116-Luc هو سلالة مشتقة من خط الخلايا السرطانية القولونية المستقيمية البشرية HCT 116، تعبر عن إنزيم اللوسيفيراز. وقد تم إنتاج هذا الخط الخلوي عن طريق التحويل الجيني باستخدام تركيبة تشفر إنزيم اللوسيفيراز الخاص بيراشة Photinus pyralis جنبًا إلى جنب مع كاسيت مقاومة البوروميسين (pac)، وبالتالي فإن التعبير عن المراسل جينيًا دائم وليس مرتبطًا بمسار معين. وبالتالي، فإن الإشارة الحيوية الضوئية تتناسب مع عدد الخلايا الحية، مما يجعل هذا النموذج مناسبًا للتتبع غير الجراحي لحجم الورم في الجسم الحي، وللتحديد الكمي السريع لقابلية الخلايا للحياة وتكاثرها في المختبر باستخدام الأطباق.

يحتفظ السلالة الأصلية HCT 116 بسماتها المميزة في هذا المشتق، بما في ذلك عدم الاستقرار الميكروساتليتي مع نقص إصلاح عدم تطابق الحمض النووي، وTP53 من النوع البري، ونمط كروموسومي شبه ثنائي الصيغة الصبغية. تتألف خلفيتها الطفريّة من KRAS p.Gly13Asp، PIK3CA p.His1047Arg، وCTNNB1 p.Ser45del متغاير الزيجوت الذي يعمل على استقرار β-catenin ويحفز إشارات Wnt الدائمة، بالإضافة إلى طفرات إزاحة الإطار متماثلة الزيجوت في TGFBR2 وACVR2A، وهي طفرات نموذجية لأورام القولون والمستقيم ذات عدم الاستقرار الميكروساتليتي (MSI). توجد متغيرات إضافية في جينات CDKN2A وEP300 وBRCA2 وPPM1D. يسمح الاندماج المستقر للمُبلغ بالتصوير الطولي للزرعات الأجنبية الموضعية وتحت الجلد في نفس الحيوان، مما يقلل من أحجام المجموعات ويُزيل الحاجة إلى نقاط النهاية النهائية في كل نقطة زمنية. يُستخدم الانتقاء بالبوروميسين للحفاظ على الجين المُدرج أثناء التكاثر الروتيني.

يُستخدم هذا السلالة على نطاق واسع في علم الأورام قبل السريري، وفي دراسات فعالية العوامل السامة للخلايا والعوامل الموجهة، وفي نماذج الانتشار والاتجاه نحو الورم، وفي فحص السمية الخلوية عالي الإنتاجية حيث توفر القراءة المتلألئة نطاقًا ديناميكيًا أوسع من الاختبارات اللونية. ونظرًا لأن التعبير عن اللوسيفيراز لا يخضع للتحكم القابل للتحفيز، فإن الإشارة تشير إلى عدد الخلايا والحالة الأيضية بدلاً من نشاط مسار معين، لذا يمكن للمركبات التي تغير مستويات ATP أو التمثيل الغذائي الخلوي أن تؤثر على التلألؤ بشكل مستقل عن قتل الخلايا. يُنصح بإجراء اختبارات قابلية البقاء المتعامدة للتأكيد، وينبغي أخذ الخلفية التي تعاني من نقص إصلاح عدم التطابق في HCT 116 في الاعتبار عند تفسير الاستجابات للعوامل المسببة لتلف الحمض النووي والعلاجات المُعدِّلة للمناعة.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان