HCT116-Luc

Az HCT 116-Luc az emberi kolorektális karcinóma sejtvonal, az HCT 116 luciferázt expresszáló származéka. A vonalat a Photinus pyralis-ból származó szentjánosbogár-luciferázt kódoló konstrukcióval, valamint egy puromicin-rezisztencia-kazettával (pac) történő transzdukcióval hozták létre, így a riporter expressziója konstitutív, nem pedig jelátviteli útvonal-függő. A biolumineszcens jel ezért arányos az életképes sejtek számával, ami alkalmassá teszi a modellt a tumorterhelés in vivo, nem invazív nyomon követésére, valamint a sejtek életképességének és proliferációjának in vitro, lemezen végzett gyors kvantifikálására.

Az eredeti HCT 116-vonal megőrizte jellegzetes tulajdonságait ebben a származékban, beleértve a mikroszatellit-instabilitást a hiányos DNS-mismatch-javítással, a vad típusú TP53-at és a közel diploid kariotípust. Mutációs hátterét a KRAS p.Gly13Asp, a PIK3CA p.His1047Arg mutációt, egy heterozigóta CTNNB1 p.Ser45del mutációt, amely stabilizálja a β-katenint és konstitutív Wnt-jelátvitelt vált ki, valamint a TGFBR2-ben és az ACVR2A-ban előforduló homozigóta kereteltolódási mutációkat, amelyek jellemzőek az MSI-típusú kolorektális daganatokra. További variánsok találhatók a CDKN2A, EP300, BRCA2 és PPM1D génekben. A riporter stabil integrációja lehetővé teszi az ortotópos és szubkután xenotranszplantátumok longitudinális képalkotását ugyanazon állatban, ami csökkenti a kohort méretét, és feleslegessé teszi a végpontértékek minden időpontban történő meghatározását. A transzgén fenntartására a rutin szaporítás során puromicin-szelekciót alkalmaznak.

Ezt a vonalat széles körben alkalmazzák a preklinikai onkológiában, citotoxikus és célzott szerek hatékonysági vizsgálataiban, metasztázis- és tumorhoming-modellekben, valamint nagy áteresztőképességű citotoxicitási szűrésekben, ahol a lumineszcens jelzés szélesebb dinamikatartományt kínál, mint a kolorimetrikus vizsgálatok. Mivel a luciferáz expressziója nem áll indukálható szabályozás alatt, a jel inkább a sejtszámot és az anyagcsere-állapotot jelzi, mint egy adott útvonal aktivitását; így az ATP-szintet vagy a sejtes anyagcserét megváltoztató vegyületek a sejtpusztítástól függetlenül is befolyásolhatják a lumineszcenciát. A megerősítéshez ortogonális életképességi vizsgálatok elvégzése ajánlott, és a DNS-károsító szerekre és az immunmoduláló kezelésekre adott válaszok értelmezésekor figyelembe kell venni a HCT 116 sejtvonal mismatch-javítási hiányosságát.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban