HCE-T

HCE-T es una línea celular de epitelio corneal humano transformada con SV40, derivada del epitelio corneal humano primario. La línea se estableció mediante infección con un vector híbrido recombinante de SV40 y adenovirus (Ad–SV40), lo que permitió la expresión estable del antígeno T grande del SV40 y la proliferación continua. La caracterización original tenía como objetivo específico generar una línea celular epitelial corneal de crecimiento continuo sin que se liberaran partículas virales libres.

En cultivo, las células HCE-T muestran la morfología epitelial típica en forma de «adoquín» y crecen como monocapas adherentes. Se han descrito características epiteliales ultraestructurales, como desmosomas y microvellosidades apicales, y se ha indicado que las células producen una queratina de 64 kD asociada a la córnea. Bajo condiciones de diferenciación adecuadas (por ejemplo, cultivo en interfaz aire-líquido sobre colágeno), las células HCE-T pueden formar estructuras estratificadas de múltiples capas y desarrollar propiedades de barrera cuantificables, lo que respalda su uso en la investigación de la superficie ocular.

Las células HCE-T se utilizan ampliamente para estudiar la función de barrera del epitelio corneal, la permeabilidad y los efectos de las formulaciones, los procesos relacionados con la migración y la reparación, y las respuestas celulares a estímulos inflamatorios o irritantes. Sin embargo, los patrones de expresión de los transportadores y los perfiles de marcadores de diferenciación pueden diferir de los de la córnea humana nativa y de los sistemas epiteliales limbares y corneales primarios. Por lo tanto, las células HCE-T son más adecuadas para estudios in vitro mecanísticos y comparativos, mientras que la extrapolación cuantitativa directa a la absorción corneal humana in vivo o a la biología de la diferenciación corneal debe realizarse con precaución.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.