HCE-T

HCE-T on SV40-transformoitu ihmisen sarveiskalvon epiteelisolulinja, joka on peräisin primaarisesta ihmisen sarveiskalvon epiteelistä. Linja perustettiin infektoimalla soluja rekombinantilla SV40–adenovirus-hybridivektorilla (Ad–SV40), mikä mahdollisti SV40-viruksen suuren T-antigeenin vakaan ilmentymisen ja jatkuvan proliferaation. Alkuperäisen karakterisoinnin tavoitteena oli nimenomaan luoda jatkuvasti kasvava sarveiskalvon epiteelisolulinja, joka ei vapauta vapaita viruspartikkeleita.

Viljelyssä HCE-T-solut osoittavat tyypillistä epiteelin ”kivikadun” morfologiaa ja kasvavat kiinnittyneinä yksikerroksina. Epiteelin ultrastruktuurisista piirteistä, kuten desmosomeista ja apikaalisista mikrovilluksista, on raportoitu, ja solujen on kuvattu tuottavan sarveiskalvoon liittyvää 64 kD:n keratiinia. Sopivissa erilaistumisolosuhteissa (esim. kollageenilla toteutettu ilma–neste-rajapintaviljely) HCE-T-solut voivat muodostaa monikerroksisia, kerrostuneita rakenteita ja kehittää mitattavia esteominaisuuksia, mikä tukee niiden käyttöä silmän pinnan tutkimuksessa.

HCE-T-soluja käytetään laajalti sarveiskalvon epiteelibarrierin toiminnan, läpäisevyyden ja formulaatioiden vaikutusten, migraatioon ja korjautumiseen liittyvien prosessien sekä solujen reaktioiden tulehdus- tai ärsyttäviin ärsykkeisiin tutkimiseen. Kuljettajaproteiinien ilmentymismallit ja erilaistumismarkkeriprofiilit voivat kuitenkin poiketa luonnollisesta ihmisen sarveiskalvosta ja primaarisista limbaalisista/sarveiskalvon epiteelijärjestelmistä. Siksi HCE-T sopii parhaiten mekanistisiin ja vertaileviin in vitro -tutkimuksiin, kun taas suoraa kvantitatiivista yleistämistä in vivo -ihmisen sarveiskalvon imeytymiseen tai sarveiskalvon erilaistumisbiologiaan tulisi suorittaa varovaisesti.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa