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HCE-T
Tissue
眼睛、角膜、上皮
Synonyms
HCET, Human Corneal Epithelial cells-Transformed, HCE, SV40-HCEC

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HCE-T

Cell line · Product number 305255

US$550.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

HCE-T 是一種源自原代人類角膜上皮的 SV40 轉化人類角膜上皮細胞系。該細胞系是透過感染重組 SV40–腺病毒雜合載體(Ad–SV40)而建立,使其能夠穩定表達 SV40 大 T 抗原並持續增殖。 最初的特性分析特別旨在建立一種能夠持續增殖且不釋放游離病毒顆粒的角膜上皮細胞系。

在培養中,HCE-T 細胞呈現典型的上皮「鵝卵石狀」形態,並以黏附單層形式生長。已有文獻記載其具備橋粒和頂端微絨毛等上皮超微結構特徵,且據描述,該細胞會產生一種與角膜相關的 64 kD 角蛋白。 在適當的分化條件下(例如,在膠原蛋白上的氣液界面培養),HCE-T 細胞可形成多層、分層結構,並發展出可測量的屏障特性,這支持了其在眼表研究中的應用。

HCE-T 細胞廣泛應用於研究角膜上皮屏障功能、通透性及製劑效應、遷移/修復相關過程,以及細胞對發炎或刺激性因子所作出的反應。然而,其轉運蛋白表達模式與分化標記物特徵,可能與天然人類角膜以及原代角膜緣/角膜上皮系統有所不同。 因此,HCE-T 最適合用於機制性及比較性的體外研究,而若要直接將其結果定量外推至體內人類角膜吸收或角膜分化生物學,則應謹慎為之。

Tissue
眼睛、角膜、上皮
Synonyms
  • HCET
  • Human Corneal Epithelial cells-Transformed
  • HCE
  • SV40-HCEC

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This human corneal epithelial cell line (HCE-T) contains an SV40 early-region construct (RSV-T / pRSV-T vector), enabling immortalization. The insert is stably integrated into primary human corneal epithelial cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
上皮性
Cell type
上皮細胞

04Identifiers

Citation
HCE-T(Cytion 型號 305255)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1272

05Expression and susceptibility

Viruses
轉化體:質體 RSV-T (pRSV-T)。此質體為一種 SV40 ori 構建體,包含 SV40 早期區域基因及 Rous 肉瘤病毒長末端重複序列。
Products
角蛋白(64kD)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12(1:1),重量比:3.1 g/L 葡萄糖,重量比:2.5 mM L-谷氨酰胺,重量比:15 mM HEPES, w: 0.5 mM 丙酮酸鈉,w: 1.2 g/L NaHCO₃(Cytion 產品編號 820400a)
Incubation atmosphere

37°C,5% CO₂,加濕環境。

Supplements
在培養基中加入 5% FBS、1% ITS(0.625 毫克/毫升人胰島素、0.625 毫克/毫升人轉鐵蛋白、0.625 微克/毫升亞硒酸鈉、0.535 毫克/毫升亞油酸、 125 mg/mL 牛血清白蛋白 (BSA))以及 10 ng/mL 人類表皮生長因子 (EGF)
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
從貼壁細胞中移除舊培養基,並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS,T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著,用 Accutase 完全覆蓋細胞,T25 培養瓶使用 1–2 毫升,T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘,使其脫附。 孵育後,將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮,然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液,將細胞重新懸浮於新鮮培養基中,並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法,排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染,每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

Freeze medium
作為冷凍保存培養基,我們使用完全生長培養基(含 FBS)+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率,或使用 CM-1 (Cytion 型號 800100),該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑,可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
Storage conditions

若需長期保存,請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前,可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中,作為短期過渡步驟。

Shipping conditions

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏,並裝於經驗證的隔熱包裝中,包裝內含有足夠的冷媒,以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後,請立即檢查容器,並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

08Donor

Donor age
49年
Ethnicity
日文

10Product details

Composition table