C4-2

A linhagem celular C4-2 é um modelo de câncer de próstata humano independente de andrógenos, derivado da linhagem celular parental LNCaP. Ela foi estabelecida por meio de um processo de seleção in vivo em etapas, envolvendo a co-injeção de células LNCaP com células estromais ósseas humanas (células MS) em camundongos imunodeficientes castrados, levando ao surgimento de tumores insensíveis aos andrógenos. A sublinha C4-2 foi derivada especificamente da variante C4 após passagens adicionais em hospedeiros castrados e mantém a capacidade de crescer e formar tumores em condições de depleção de andrógenos, sem a necessidade de suporte estromal.

As células C4-2 mantêm a produção do antígeno específico da próstata (PSA) e a expressão do receptor de andrógeno (AR), incluindo a mutação pontual característica T877A do AR herdada da LNCaP, mas apresentam uma resposta reduzida aos andrógenos em comparação com a linhagem parental. Enquanto as células LNCaP requerem andrógenos para o crescimento, as células C4-2 proliferam em ambientes com deficiência de andrógenos e continuam a expressar o PSA e genes regulados pelo AR, tornando-as um modelo robusto para o câncer de próstata resistente à castração (CRPC). In vitro, as células C4-2 crescem mais rapidamente do que as LNCaP em condições padrão de cultura e também apresentam maior capacidade tumorigênica in vivo. Quando injetadas por via subcutânea em camundongos imunocomprometidos, as células C4-2 formam tumores prontamente, uma característica que contrasta com o potencial tumorigênico mais lento ou menos consistente das células LNCaP.

O modelo C4-2 tem sido amplamente utilizado para estudar os mecanismos de resistência à terapia de privação androgênica (ADT), o papel do metabolismo androgênico intracrino e as vias moleculares subjacentes à progressão do CRPC. Ele mantém a expressão do antígeno de membrana específico da próstata (PSMA), embora em níveis mais baixos do que as células LNCaP, e apresenta respostas únicas à estimulação androgênica e às terapias antiandrogênicas. Essas características tornam o C4-2 um modelo fundamental para a avaliação de novas terapêuticas direcionadas ao câncer de próstata avançado.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.