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BT-474-Zellen
Gewebe
Brust, Brustdrüse
Krankheit
Invasives duktales Karzinom
Metastasenherd
Duktal
Synonyme
Bt-474, BT474

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BT-474-Zellen

Cell line · Artikelnummer 300131

BT-474 ist eine menschliche Brustkrebszelllinie, die aus dem duktalen Karzinom einer 60-jährigen Frau gewonnen wurde. Diese Zelllinie ist Östrogen- und Progesteronrezeptor-...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

BT-474 ist eine menschliche Brustkrebszelllinie, die aus dem duktalen Karzinom einer 60-jährigen Frau gewonnen wurde. Diese Zelllinie ist Östrogen- und Progesteronrezeptor-positiv, was sie zu einem wertvollen Modell für die Untersuchung hormonempfindlicher Brustkrebsarten macht. BT-474-Zellen zeichnen sich außerdem durch eine Überexpression von HER2/neu (humaner epidermaler Wachstumsfaktor-Rezeptor 2) aus, einem Protein, das verstärkt vorkommt und eine entscheidende Rolle bei der Pathogenese und dem Fortschreiten bestimmter aggressiver Brustkrebsarten spielt.

Die Zelllinie BT-474 wird in der onkologischen Forschung häufig verwendet, um die molekularen Mechanismen der Brustkrebsausbreitung zu untersuchen und therapeutische Strategien zu testen, die auf Hormonrezeptoren und den HER2-Signalweg abzielen. Diese Zellen sind besonders nützlich für die Untersuchung der Wirksamkeit von Therapien, die auf HER2 abzielen, wie z. B. Trastuzumab (Herceptin), und für die Erforschung von Resistenzmechanismen gegen diese Behandlungen. Die Zelllinie hat auch zu Fortschritten im Verständnis dessen beigetragen, wie hormonelle Manipulationen das Wachstum und das Überleben von Krebszellen beeinflussen, was Einblicke in potenzielle Behandlungsansätze für hormonabhängige Tumore ermöglicht.

Gewebe
Brust, Brustdrüse
Krankheit
Invasives duktales Karzinom
Metastasenherd
Duktal
Synonyme
  • Bt-474
  • BT474

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Ja, in Nacktmäusen
MSI-Status
Stabil (MSS)
Karyotyp
Modus = 55, Bereich = 50 bis 112, bimodale Verschiebung 58 - 59 und 100 in späteren Passagen mit 3 Markerchromosomen
Verdopplungszeit
60 bis 80 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
BT-474 (Cytion Katalognummer 300131)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0179

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
HER-2/NEU+, ER+, PR+
Isoenzyme
G6PD, B, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Phänotyp-Häufigkeitsprodukt: 0.0426
Mutationsprofil
TP53 mut
Anfälligkeit für Viren
Maus-Mammatumor-Virus (RIII-MuMTV)

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 10 Mikrogramm/ml Insulin
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
2 x 104 Zellen/cm² ergeben in etwa 4 Tagen eine weitgehend konfluente Schicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nahezu 100 % wiederhergestellte Zellen mit >90 % Lebensfähigkeit
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
60 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch