Siirry sisältöön
BT-474-solut
Kudos
Rinta, rintarauhanen
Sairaus
Invasiivinen duktaalikarsinooma
Metastaasikohde
Ductal
Synonyymit
Bt-474, BT474

Asiakirjat

BT-474-solut

Cell line · Tuotenumero 300131

BT-474 on ihmisen rintasyöpäsolulinja, joka on peräisin 60-vuotiaan naisen duktaalisesta karsinoomasta. Tämä solulinja on estrogeeni- ja progesteronireseptori...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

BT-474 on ihmisen rintasyöpäsolulinja, joka on peräisin 60-vuotiaan naisen duktaalikarsinoomasta. Tämä solulinja on estrogeeni- ja progesteronireseptoripositiivinen, mikä tekee siitä arvokkaan mallin hormonireagoivien rintasyöpien tutkimiseen. BT-474-soluille on ominaista myös HER2/neu:n (ihmisen epidermaalisen kasvutekijän reseptori 2) yliekspressio, joka on monistunut proteiini ja jolla on kriittinen rooli tiettyjen aggressiivisten rintasyöpätyyppien patogeneesissä ja etenemisessä.

BT-474-solulinjaa käytetään laajalti onkologisessa tutkimuksessa rintasyövän proliferaation molekyylimekanismien tutkimiseen ja hormonireseptoreihin ja HER2-reittiin kohdistuviin terapeuttisiin strategioihin. Nämä solut ovat erityisen käyttökelpoisia tutkittaessa HER2:een kohdistettujen hoitojen, kuten trastutsumabin (Herceptin), tehoa ja tutkittaessa resistenssimekanismeja näitä hoitoja vastaan. Solulinja on myös edistänyt sen ymmärtämistä, miten hormonaaliset manipulaatiot vaikuttavat syöpäsolujen kasvuun ja eloonjäämiseen, mikä antaa tietoa mahdollisista hormoniriippuvaisten kasvainten hoitokeinoista.

Kudos
Rinta, rintarauhanen
Sairaus
Invasiivinen duktaalikarsinooma
Metastaasikohde
Ductal
Synonyymit
  • Bt-474
  • BT474

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä
MSI-tila
Vakaa (MSS)
Karyotyyppi
Moodi = 55, vaihteluväli = 50-112, bimodaalinen siirtymä 58-59 ja 100 myöhemmissä vaiheissa, joissa on 3 merkkikromosomia
Kaksinkertaistumisaika
60-80 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
BT-474 (Cytionin luettelonumero 300131)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_0179

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
HER-2/NEU+, ER+, PR+
Isoentsyymit
G6PD, B, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Fenotyypin frekvenssituote: 0.0426
Mutaatioprofiili
TP53 mut
Viruksille altistuminen
Hiiren rintarauhaskasvainvirus (RIII-MuMTV)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoosia, w: 2,5 mM L-glutamiinia, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natriumpyruvaattia, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820400a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Lisätään väliaineeseen 10 % FBS, 10 mikrogrammaa/ml insuliinia
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
2 x 104 solua/cm2 tuottaa noin 4 päivässä lähes yhtenäisen kerroksen.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Lähes 100 % talteenotetuista soluista, joiden elinkelpoisuus on > 90 %
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
60 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen