Přejít na obsah
Buňky BT-474
Tkáň
Prsa, mléčná žláza
Nemoc
Invazivní duktální karcinom
Místo metastázy
Duktální
Synonyma
Bt-474, BT474

Dokumenty

Buňky BT-474

Cell line · Číslo výrobku 300131

BT-474 je lidská buněčná linie rakoviny prsu, odvozená z duktálního karcinomu 60leté ženy. Tato buněčná linie je pozitivní na estrogenové a progesteronové receptory...

€430.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
  • CoA
1

01Obecné informace

Popis

BT-474 je lidská buněčná linie karcinomu prsu odvozená z duktálního karcinomu 60leté ženy. Tato buněčná linie je pozitivní na estrogenové a progesteronové receptory, což z ní činí cenný model pro studium karcinomu prsu reagujícího na hormony. Buňky BT-474 se rovněž vyznačují nadměrnou expresí HER2/neu (receptoru pro lidský epidermální růstový faktor 2), což je protein, který je amplifikován a hraje klíčovou roli v patogenezi a progresi některých agresivních typů karcinomu prsu.

Buněčná linie BT-474 se hojně využívá v onkologickém výzkumu ke studiu molekulárních mechanismů proliferace karcinomu prsu a k testování terapeutických strategií zaměřených na hormonální receptory a dráhu HER2. Tyto buňky jsou zvláště užitečné pro zkoumání účinnosti terapií zaměřených na HER2, jako je trastuzumab (Herceptin), a pro zkoumání mechanismů rezistence vůči těmto léčebným postupům. Tato buněčná linie také přispěla k pokroku v pochopení toho, jak hormonální manipulace ovlivňují růst a přežívání nádorových buněk, což poskytuje poznatky o možných léčebných postupech u hormonálně závislých nádorů.

Tkáň
Prsa, mléčná žláza
Nemoc
Invazivní duktální karcinom
Místo metastázy
Duktální
Synonyma
  • Bt-474
  • BT474

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Žena
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Tumorogenní
Ano, u nahých myší
Stav MSI
Stabilní (MSS)
Karyotyp
Mód = 55, rozsah = 50 až 112, bimodální posun 58 - 59 a 100 v pozdějších pasážích se 3 markerovými chromozomy
Doba zdvojnásobení
60 až 80 hodin

04Identifikátory

Citace
BT-474 (katalogové číslo Cytion 300131)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0179

05Exprese a náchylnost

Exprimované receptory
HER-2/NEU+, ER+, PR+
Isoenzymy
G6PD, B, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, produkt fenotypové frekvence: 0.0426
Mutační profil
Mutace TP53
Náchylnost k virům
Myší virus nádoru prsu (RIII-MuMTV)

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glukózy, w: 2,5 mM L-Glutaminu, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM pyruvátu sodného, w: 1,2 g/l NaHCO3 (číslo výrobku Cytion 820400a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS, 10 mikrogramů/ml inzulínu
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
2 x 104 buněk/cm2 vytvoří přibližně za 4 dny téměř souvislou vrstvu.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Téměř 100 % obnovených buněk s životaschopností >90 %
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
60 let
Etnická příslušnost
Kavkazský