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Cellule BT-474
Tessuto
Seno, ghiandola mammaria
Malattia
Carcinoma duttale invasivo
Sito metastatico
Duttale
Sinonimi
Bt-474, BT474

Documenti

Cellule BT-474

Cell line · Codice prodotto 300131

La BT-474 è una linea cellulare di carcinoma mammario umano, derivata dal carcinoma duttale di una donna di 60 anni. Questa linea cellulare è positiva ai recettori degli estrogeni e del progesterone...

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01Informazioni generali

Descrizione

BT-474 è una linea cellulare di cancro al seno umano, derivata dal carcinoma duttale di una donna di 60 anni. Questa linea cellulare è positiva ai recettori per gli estrogeni e il progesterone, il che la rende un modello prezioso per lo studio dei tumori al seno ormono-responsivi. Le cellule BT-474 sono inoltre caratterizzate dalla sovraespressione di HER2/neu (recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano), una proteina amplificata che svolge un ruolo critico nella patogenesi e nella progressione di alcuni tipi aggressivi di cancro al seno.

La linea cellulare BT-474 è ampiamente utilizzata nella ricerca oncologica per studiare i meccanismi molecolari della proliferazione del tumore al seno e per testare strategie terapeutiche mirate ai recettori ormonali e alla via di HER2. Queste cellule sono particolarmente utili per esaminare l'efficacia delle terapie mirate a HER2, come il trastuzumab (Herceptin), e per esplorare i meccanismi di resistenza a questi trattamenti. La linea cellulare ha anche contribuito a far capire come le manipolazioni ormonali influenzino la crescita e la sopravvivenza delle cellule tumorali, fornendo spunti per potenziali approcci terapeutici per i tumori ormono-dipendenti.

Tessuto
Seno, ghiandola mammaria
Malattia
Carcinoma duttale invasivo
Sito metastatico
Duttale
Sinonimi
  • Bt-474
  • BT474

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi
Stato MSI
Stabile (MSS)
Cariotipo
Modalità = 55, range = 50-112, spostamento bimodale 58-59 e 100 nei passaggi successivi con 3 cromosomi marker
Tempo di raddoppio
da 60 a 80 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
BT-474 (numero di catalogo Cytion 300131)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0179

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
LEI-2/NEU+, ER+, PR+
Isoenzimi
G6PD, B, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0426
Profilo mutazionale
TP53 mut
Suscettibilità ai virus
Virus del tumore mammario del topo (RIII-MuMTV)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 10 microgrammi/mL di insulina
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
2 x 104 cellule/cm2 produrranno uno strato prevalentemente confluente in circa 4 giorni.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Quasi il 100% delle cellule recuperate con una vitalità >90%
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
60 anni
Etnia
Caucasico