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Células BT-474
Pañuelo de papel
Pecho, glándula mamaria
Enfermedad
Carcinoma ductal invasivo
Lugar de metástasis
Ductal
Sinónimos
Bt-474, BT474

Documentos

Células BT-474

Cell line · Número de producto 300131

La BT-474 es una línea celular de cáncer de mama humano, derivada del carcinoma ductal de una mujer de 60 años. Esta línea celular es positiva para los receptores de estrógeno y progesterona...

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01Información general

Descripción

BT-474 es una línea celular de cáncer de mama humano, derivada del carcinoma ductal de una mujer de 60 años. Esta línea celular es positiva para los receptores de estrógeno y progesterona, lo que la convierte en un modelo valioso para estudiar los cánceres de mama hormono-responsivos. Las células BT-474 también se caracterizan por la sobreexpresión de HER2/neu (receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano), una proteína que está amplificada y desempeña un papel crítico en la patogénesis y progresión de ciertos tipos agresivos de cáncer de mama.

La línea celular BT-474 se utiliza ampliamente en la investigación oncológica para estudiar los mecanismos moleculares de la proliferación del cáncer de mama y ensayar estrategias terapéuticas dirigidas contra los receptores hormonales y la vía HER2. Estas células son especialmente útiles para examinar la eficacia de terapias dirigidas contra HER2, como el trastuzumab (Herceptin), y para explorar los mecanismos de resistencia a estos tratamientos. La línea celular también ha contribuido a entender cómo las manipulaciones hormonales afectan al crecimiento y la supervivencia de las células cancerosas, lo que ha aportado información sobre posibles tratamientos de tumores hormonodependientes.

Pañuelo de papel
Pecho, glándula mamaria
Enfermedad
Carcinoma ductal invasivo
Lugar de metástasis
Ductal
Sinónimos
  • Bt-474
  • BT474

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
De tipo epitelial
Tumorigénico
Sí, en ratones desnudos
Estado de MSI
Estable (MSS)
Cariotipo
Modo = 55, rango = 50 a 112, desplazamiento bimodal 58 - 59 y 100 en los últimos pasajes con 3 cromosomas marcadores
Tiempo de duplicación
de 60 a 80 horas

04Identificadores

Referencia
BT-474 (número de catálogo 300131 de Cytion)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0179

05Expresión y susceptibilidad

Receptores expresados
HER-2/NEU+, ER+, PR+
Isoenzimas
G6PD, B, PGM3, 1, PGM1, 1, ES-D, 1, Me-2, 0, AK-1, 1, GLO-1, 1, Fenotipo Frecuencia Producto: 0.0426
Perfil mutacional
TP53 mut
Susceptibilidad a los virus
Virus del tumor mamario de ratón (RIII-MuMTV)

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L de glucosa, w: 2,5 mM de L-glutamina, w: 15 mM de HEPES, w: 0,5 mM de piruvato sódico, w: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artículo de Cytion 820400a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Suplementar el medio con 10% FBS, 10 microgramos/mL de Insulina
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
2 x 104 células/cm2 producirán una capa prácticamente confluente en unos 4 días.
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Casi el 100% de células recuperadas con una viabilidad >90%
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
60 años
Origen étnico
Caucásico