Μετάβαση στο περιεχόμενο
PA317
Ιστός
Έμβρυο
Συνώνυμα
pA317

Έγγραφα

PA317

Cell line · Αριθμός προϊόντος 305617

€550.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής
Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η PA317 είναι μια κυτταρική σειρά ινοβλαστών ποντικού που έχει τροποποιηθεί γενετικά ώστε να εκφράζει σταθερά ένα αμφιτροπικό σύστημα συσκευασίας ρετροϊών. Αυτή η κυτταρική σειρά χρησιμοποιείται ευρέως στη γονιδιακή θεραπεία και στην έρευνα της μοριακής βιολογίας ως παραγωγός ανασυνδυασμένων ρετροϊών ικανών να μεταδώσουν γονίδια σε ένα ευρύ φάσμα κυττάρων θηλαστικών. Η PA317 προέρχεται από ινοβλάστες NIH/3T3 και διατηρεί τη μορφολογία των ινοβλαστών, ενώ παράλληλα παρουσιάζει την ικανότητα να παράγει ρετροϊούς υψηλού τίτλου.

Τα κύτταρα PA317 έχουν σχεδιαστεί ώστε να παρέχουν τα απαραίτητα συστατικά των ρετροϊών, συμπεριλαμβανομένων των γονιδίων gag, pol και env, χωρίς όμως να διαθέτουν αλληλουχίες ιών ικανές για αναπαραγωγή. Αυτό εξασφαλίζει την ασφάλεια σε πειραματικά και θεραπευτικά πλαίσια, αποτρέποντας τον σχηματισμό ρετροϊών ικανών για αναπαραγωγή. Η αμφιτροπική πρωτεΐνη περιβλήματος που εκφράζεται από τα κύτταρα PA317 επιτρέπει στους παραγόμενους ρετροϊούς να μολύνουν ένα ευρύ φάσμα κυτταρικών τύπων σε διαφορετικά είδη, καθιστώντας αυτή τη κυτταρική σειρά ιδιαίτερα πολύτιμη για εφαρμογές που απαιτούν αποτελεσματική μεταφορά γονιδίων.

Αυτή η κυτταρική σειρά χρησιμοποιείται συνήθως για την παραγωγή ρετροϊικών φορέων για τη μεταφορά γονιδίων σε προκλινικές μελέτες, συμπεριλαμβανομένης της έρευνας για τον καρκίνο, της γενετικής μηχανικής και της αναγεννητικής ιατρικής. Αποτελεί επίσης την προτιμώμενη επιλογή για την επικύρωση κατασκευών ρετροϊικών φορέων και τη βελτιστοποίηση των πρωτοκόλλων παραγωγής ιών. Η PA317 παρέχει μια αξιόπιστη πλατφόρμα για τη μεταφορά γονιδίων με τη μεσολάβηση ρετροϊών, υποστηρίζοντας τις εξελίξεις στη γονιδιακή θεραπεία και την έρευνα στη λειτουργική γονιδιωματική.

Ιστός
Έμβρυο
Εφαρμογές
3D καλλιέργεια κυττάρων
Συνώνυμα
  • pA317

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Ποντίκι
Σεξ
Άνδρας
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This PA317 retroviral packaging line contains MoMLV gag/pol/env components enabling production of replication-defective retroviral particles. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
2

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Ινοβλάστες που μοιάζουν με ινοβλάστες
Τύπος κυττάρου
Ινοβλάστες

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
PA317 (αριθμός καταλόγου Cytion 305617)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
10090
Κελλοσαύρος
CVCL_3920

05Έκφραση και ευαισθησία

Ιοί
Ιός της λευχαιμίας των ποντικών Moloney (MoMLV)

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με TrypLE Express, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Φυλή / υποείδος
NIH Swiss

10Λεπτομέρειες προϊόντος

Πίνακας σύνθεσης