PA317

A PA317 é uma linhagem celular de fibroblastos murinos que foi geneticamente modificada para expressar de forma estável um sistema de empacotamento retroviral anfotrópico. Essa linhagem celular é amplamente utilizada em pesquisas de terapia gênica e biologia molecular como produtora de retrovírus recombinantes capazes de transduzir uma ampla gama de células de mamíferos. A PA317 é derivada de fibroblastos NIH/3T3 e mantém a morfologia de fibroblastos, ao mesmo tempo em que apresenta a capacidade de produzir retrovírus de alto título.

As células PA317 foram projetadas para fornecer componentes retrovirais essenciais in trans, incluindo os genes gag, pol e env, sem possuir sequências virais capazes de se replicar. Isso garante a segurança em contextos experimentais e terapêuticos, impedindo a formação de retrovírus capazes de se replicar. A proteína de envelope anfotrópica expressa pelas células PA317 permite que os retrovírus produzidos infectem uma ampla variedade de tipos de células em diferentes espécies, tornando essa linhagem celular particularmente valiosa para aplicações que exigem transferência gênica eficiente.

Essa linhagem celular é comumente empregada para produzir vetores retrovirais para entrega de genes em estudos pré-clínicos, incluindo pesquisa sobre câncer, engenharia genética e medicina regenerativa. É também a escolha preferida para validar construções de vetores retrovirais e otimizar protocolos de produção viral. A PA317 oferece uma plataforma confiável para a transferência gênica mediada por retrovírus, contribuindo para os avanços na terapia gênica e na pesquisa em genômica funcional.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.