Mine otse sisu juurde
PA317
Kude
Embrüo
Sünonüümid
pA317

Dokumendid

PA317

Cell line · Toote number 305617

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

PA317 on hiire fibroblastide rakuliin, mis on geneetiliselt muundatud nii, et see ekspresseerib stabiilselt amfotroopset retroviiruse pakkimissüsteemi. Seda rakuliini kasutatakse laialdaselt geeniteraapias ja molekulaarbioloogia uuringutes rekombinantseid retroviiruseid tootva rakuliinina, mis suudab nakatada laia valikut imetajate rakke. PA317 on saadud NIH/3T3 fibroblastidest ja säilitab fibroblastide morfoloogia, olles samas võimeline tootma kõrge tiitriga retroviiruseid.

PA317 rakud on loodud pakkuma olulisi retroviiruslikke komponente trans-vormis, sealhulgas gag-, pol- ja env-geene, kuid neil puuduvad replikatsioonivõimelised viirusjärjestused. See tagab ohutuse nii eksperimentaalsetes kui ka terapeutilistes kontekstides, takistades replikatsioonivõimeliste retroviiruste teket. PA317 rakkudes ekspresseeritud amfotroopne ümbrisvalk võimaldab toodetud retroviirustel nakatada mitmesuguseid rakutüüpe erinevatel liikidel, mistõttu on see rakuliin eriti väärtuslik rakendustes, mis nõuavad tõhusat geenisiiret.

Seda rakuliini kasutatakse laialdaselt retroviirusvektorite tootmiseks geenide edastamiseks prekliinilistes uuringutes, sealhulgas vähiuuringutes, geenitehnoloogias ja regeneratiivses meditsiinis. Samuti on see eelistatud valik retroviirusvektori konstruktide valideerimiseks ja viiruslike tootmisprotokollide optimeerimiseks. PA317 pakub usaldusväärset platvormi retroviiruste vahendatud geenisiirdamiseks, toetades edusamme geeniteraapias ja funktsionaalse genoomika uurimistöös.

Kude
Embrüo
Rakendused
3D rakukultuur
Sünonüümid
  • pA317

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This PA317 retroviral packaging line contains MoMLV gag/pol/env components enabling production of replication-defective retroviral particles. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
2

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastilaadsed
Rakutüüp
Fibroblastide

04Tunnused

Viide
PA317 (Cytioni katalooginumber 305617)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_3920

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirused
Moloney hiire leukeemiaviirus (MoMLV)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult TrypLE Expressiga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeeruda 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
NIH Swiss

10Toote üksikasjad

Koostis tabel