Skip to content
PA317
Tissue
เอ็มบริโอ
Synonyms
pA317

Documents

PA317

Cell line · Product number 305617

€550.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

PA317 เป็นสายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ของหนูที่ได้รับการดัดแปลงทางพันธุกรรมเพื่อแสดงออกอย่างคงที่ระบบบรรจุเรโทรไวรัสแบบแอมฟโทรปิก สายเซลล์นี้ถูกใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยด้านการบำบัดด้วยยีนและชีววิทยาโมเลกุล ในฐานะผู้ผลิตเรโทรไวรัสแบบรีคอมบิแนนท์ ซึ่งสามารถถ่ายทอดยีนไปยังเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้หลากหลายชนิด PA317 มีต้นกำเนิดจากเซลล์ไฟโบรบลาสต์ NIH/3T3 และยังคงรักษารูปแบบของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ไว้ พร้อมทั้งแสดงความสามารถในการผลิตเรโทรไวรัสที่มีไทเตอร์สูง

เซลล์ PA317 ได้รับการออกแบบเพื่อส่งมอบองค์ประกอบเรโทรไวรัสที่จำเป็นแบบ trans รวมถึงยีน gag, pol และ env โดยไม่มีลำดับพันธุกรรมของไวรัสที่มีความสามารถในการจำลองตัวเอง ซึ่งช่วยรับประกันความปลอดภัยในบริบทการทดลองและการรักษา โดยการป้องกันการก่อตัวของเรโทรไวรัสที่มีความสามารถในการจำลองตัวเอง โปรตีนเอนเวลอปแบบแอมฟโทรปิกที่เซลล์ PA317 แสดงออก ทำให้เรโทรไวรัสที่ผลิตได้สามารถติดเชื้อเซลล์ประเภทต่าง ๆ ในหลายสปีชีส์ ซึ่งทำให้สายเซลล์นี้มีคุณค่าเป็นพิเศษสำหรับการประยุกต์ใช้ที่ต้องการการถ่ายโอนยีนอย่างมีประสิทธิภาพ

สายเซลล์นี้มักถูกใช้เพื่อผลิตเวกเตอร์เรโทรไวรัสสำหรับการส่งยีนในการศึกษาขั้นก่อนคลินิก รวมถึงการวิจัยโรคมะเร็ง วิศวกรรมพันธุกรรม และการแพทย์ฟื้นฟู นอกจากนี้ยังเป็นตัวเลือกที่นิยมสำหรับการตรวจสอบความถูกต้องของโครงสร้างเวกเตอร์เรโทรไวรัสและการปรับปรุงขั้นตอนการผลิตไวรัส PA317 เป็นแพลตฟอร์มที่เชื่อถือได้สำหรับการถ่ายโอนยีนโดยใช้เรโทรไวรัส ซึ่งช่วยสนับสนุนความก้าวหน้าในการรักษาด้วยยีนและการวิจัยด้านจีโนมิกส์เชิงหน้าที่

Tissue
เอ็มบริโอ
Applications
การเพาะเลี้ยงเซลล์แบบสามมิติ
Synonyms
  • pA317

02Classification

Organism
Mouse
Sex
Male
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This PA317 retroviral packaging line contains MoMLV gag/pol/env components enabling production of replication-defective retroviral particles. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
2

03Characteristics

Morphology
คล้ายไฟโบรบลาสต์
Cell type
ไฟโบรบลาสต์

04Identifiers

Citation
PA317 (หมายเลขในแคตตาล็อก Cytion 305617)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_3920

05Expression and susceptibility

Viruses
ไวรัสลูคีเมียของหนู Moloney (MoMLV)

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 4 มิลลิโมลาร์ แอล-กลูตามีน, w: 3.7 กรัม/ลิตร NaHCO3, w: 1.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต (หมายเลขบทความ Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย TrypLE Express โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (g) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเลี้ยงเซลล์ใหม่ที่บรรจุอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Breed / subspecies
สถาบันสุขภาพแห่งชาติสวิตเซอร์แลนด์

10Product details

Composition table