Prejsť na obsah
PA317
Tkanivo
Embryo
Synonymá
pA317

Dokumenty

PA317

Cell line · Číslo výrobku 305617

€550.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

PA317 je myšia fibroblastová bunková línia, ktorá bola geneticky upravená tak, aby stabilne exprimovala amfotropný retrovirový baliaci systém. Táto bunková línia sa široko využíva v génovej terapii a vo výskume molekulárnej biológie ako zdroj rekombinantných retrovírusov schopných transdukovať široké spektrum cicavčích buniek. PA317 pochádza z fibroblastov NIH/3T3 a zachováva si morfológiu fibroblastov, pričom vykazuje schopnosť produkovať retrovírusy s vysokým titrom.

Bunky PA317 sú navrhnuté tak, aby poskytovali esenciálne retrovirové komponenty trans, vrátane génov gag, pol a env, pričom im chýbajú vírusové sekvencie schopné replikácie. Tým sa zabezpečuje bezpečnosť v experimentálnych a terapeutických kontextoch tým, že sa zabraňuje tvorbe retrovírusov schopných replikácie. Amfotropný obalový proteín exprimovaný bunkami PA317 umožňuje produkovaným retrovírusom infikovať širokú škálu typov buniek rôznych druhov, čo robí túto bunkovú líniu obzvlášť cennou pre aplikácie vyžadujúce efektívny génový transfer.

Táto bunková línia sa bežne používa na produkciu retrovirových vektorov na dodávanie génov v predklinických štúdiách, vrátane výskumu rakoviny, genetického inžinierstva a regeneratívnej medicíny. Je tiež preferovanou voľbou na validáciu konštruktov retrovirových vektorov a optimalizáciu protokolov vírusovej produkcie. PA317 poskytuje spoľahlivú platformu pre génový prenos sprostredkovaný retrovírusmi, čím podporuje pokrok v génovej terapii a vo výskume funkčnej genomiky.

Tkanivo
Embryo
Aplikácie
3D kultivácia buniek
Synonymá
  • pA317

02Klasifikácia

Organizmus
Myš
Sex
Muž
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This PA317 retroviral packaging line contains MoMLV gag/pol/env components enabling production of replication-defective retroviral particles. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
2

03Charakteristiky

Morfológia
Fibroblastom podobné
Typ bunky
Fibroblasty

04Identifikátory

Citácia
PA317 (katalógové číslo Cytion 305617)
Daňové identifikačné číslo NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_3920

05Prejav a náchylnosť

Vírusy
Vírus myšej leukémie Moloneyho (MoMLV)

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutamínu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne zakryte prípravkom TrypLE Express, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Plemeno / poddruh
NIH Swiss

10Podrobnosti o produkte

Tabuľka zloženia