Siirry sisältöön
HEK293-VEGF-TM
Kudos
Sikiön munuaiset
Sairaus
Muunnettu/ikuisesti elävä; ei aiheuta kasvaimia (HEK293-tausta)

Asiakirjat

HEK293-VEGF-TM

Cell line · Tuotenumero 305991

Vastuuvapauslauseke: Solulinjojen kohdalla ilmoitetut hinnat koskevat yksinomaan akateemisia ja voittoa tavoittelemattomia asiakkaita. Kaupallisten toimijoiden osalta hinnat...

€1,600.00ilman veroja ja toimituskuluja

Räätälöinti / Suositukset

Valmistetaan tilauksesta
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

Vastuuvapauslauseke: Solulinjojen hinnat koskevat yksinomaan akateemisia ja voittoa tavoittelemattomia asiakkaita. Kaupallisille toimijoille hinta on noin 6 250 euroa.
Jos edustat kaupallista toimijaa tai et ole varma, kumpaanko ryhmään kuulut, ota meihin yhteyttä.


HEK293-VEGF-TM-solut ovat ihmisen alkion munuaisperäisiä 293 (HEK293) -soluja, jotka on muokattu ilmentämään stabiilisti membraaniin kiinnittynyttä verisuonten endoteelisen kasvutekijän (VEGF) muotoa. Ne on suunniteltu esittämään VEGF:ää solun pinnalla fuusioitumalla transmembraanidomeenin kanssa. Toisin kuin solunulkoiseen ympäristöön erittyvät liukoiset VEGF-isoformit, VEGF-TM-konstruktit mahdollistavat VEGF-ligandien paikallisen ja pitkäkestoisen esittämisen plasmamembraanilla, mikä helpottaa VEGF-reseptori-vuorovaikutusten ja solu-solu-signalointimekanismien hallittua tutkimusta. Nämä muokatut mallit ovat hyödyllisiä pääasiassa VEGFR1:n (FLT1) ja VEGFR2:n (KDR) välittämien angiogeenisten signalointireittien tutkimuksessa, jotka säätelevät endoteelisolujen proliferaatiota, migraatiota, verisuonten läpäisevyyttä ja neovaskularisaatiota.

HEK293-VEGF-TM-soluja käytetään laajalti angiogeneesitutkimuksessa ja terapeuttisessa kehityksessä VEGF:ään kohdistuvien vasta-aineiden, reseptoriloukkojen, antiangiogeenisten biologisten lääkkeiden ja muokattujen immuunisoluterapioiden karakterisoimiseksi. Kalvoon ankkuroitu VEGF:n esittäminen mahdollistaa reseptorisitoutumisen, ligandin saatavuuden, vasta-aineen eston, reseptoriklusteroinnin ja solukontaktista riippuvien signalointitapahtumien kvantitatiivisen arvioinnin. Nämä solut ovat erityisen arvokkaita virtaussytometriaan perustuvissa sitoutumismäärityksissä, yhteisviljelyjärjestelmissä, raporttimäärityksissä ja suurikapasiteettisissa seulonta-alustoissa, joilla arvioidaan VEGF/VEGFR-reitin estämistä. Lisäksi HEK293-VEGF-TM-mallit voivat tukea tutkimuksia, joissa tarkastellaan synapsien muodostumista ja kohteen tunnistamista VEGF:ään kohdistuvien CAR-T-solujen tai bispesifisten vasta-ainealustojen avulla.

Kudos
Sikiön munuaiset
Sairaus
Muunnettu/ikuisesti elävä; ei aiheuta kasvaimia (HEK293-tausta)
Sovellukset
Transmembraanisen VEGF:n (VEGF-TM) tutkimus; anti-VEGF-vasta-aineiden kehittäminen; kasvaimen angiogeneesin tutkimukset; ADCC/CDC-määritykset; virtaussytometria; onkologian ja oftalmologian tutkimus

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a transmembrane VEGF (VEGF-TM) expression construct for cell-surface VEGF studies and anti-angiogenic therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Epiteelisolut
Kaksinkertaistumisaika
noin 24–36 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
HEK293-VEGF-TM (Cytionin tuotenumero 305991)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_6G30

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
VEGF-TM

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennä elatusainetta 10 % FBS:llä, 1 mM natriumpyruvaatilla, 10 mM HEPES:llä, 1 % NEAA:lla. Lisää genetiinejä (G418-Sulfat), jotta lopullinen pitoisuus on 1 mg/ml.
Dissosiaatioreagenssi
Trypsin-EDTA
Soluviljely
Rutiininomaiseen adherenttiseen soluviljelyyn: Imeytä vanha elatusaine adheesiosoluista ja pese ne PBS:llä jäljellä olevan elatusaineen poistamiseksi. Kun PBS on imetty, lisätään sopiva määrä trypsiini/EDTA-liuosta viljelyastian koon mukaan (esim. 1 ml T25-pulloon, 3 ml T75-pulloon) ja inkuboidaan huoneenlämmössä tai 37 °C:ssa, kunnes solut irtoavat (5-10 minuuttia). Seuraa irtoamista mikroskoopilla ja napauta astiaa tarvittaessa varovasti solujen irrottamiseksi. Kun solut ovat irronneet, lisätään täyttä elatusainetta trypsiinin/EDTA:n inaktivoimiseksi, solut suspendoidaan varovasti uudelleen ja siirretään solususpensiosta aliquota uuteen kasvatusastiaan, joka sisältää tuoretta elatusainetta. Aseta astia inkubaattoriin, jonka lämpötila on 37 °C jahiilidioksidipitoisuus 5 %, ja vaihda väliaine 2-3 päivän välein.
Jakosuhde
1–5
Kylvötiheys
2–4 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen

Sulattamisen jälkeen solut jaetaan T25-pulloihin suhteessa 1:2-1:3 ja annetaan solujen toipua pakastuksesta ja tarttua vähintään 24 tuntia.

Parhaan kiinnittymisen ja elinkelpoisuuden saavuttamiseksi solujen sulattamisen jälkeen suosittelemme kollageenipinnoitettujen pullojen tai levyjen käyttämistä ensimmäiseen kylvöön kryokuntoutuksen jälkeen. Kollageenipinnoitusta ei tarvita solujen myöhemmässä rutiiniviljelyssä.

Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Sikiö