Tartalomra ugrás
LLC-MK2
Szövet
Vese
Szinonimák
Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

Dokumentumok

LLC-MK2

Cell line · Termékszám 305149

LLC-MK2 is a continuous epithelial cell line established from the renal tissue of adult rhesus monkeys (*Macaca mulatta*). This cell line was originally i...

€430.00adó és szállítási költség nélkül

Személyre szabás / Ajánlások

Raktáron van
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
  • CoA
  • CoA
1

01Általános információk

Leírás

Az LLC-MK2 egy felnőtt rhesusmajmok (*Macaca mulatta*) veseszövetéből létrehozott folyamatos epitélsejtvonal. Ezt a sejtvonalat eredetileg az 1950-es években izolálták hat rhesusmajom összevont veseszövetének tripszinizálásával. Az LLC-MK2 sejtek adherens növekedési tulajdonságokkal rendelkeznek, és a virológiában széles körben használták őket a különböző vírusokkal, többek között a bovine viral diarrhea virus 1, a human poliovirus 1 és a human coxsackievirus B4 vírusokkal szembeni nagyfokú érzékenységük miatt. A sejtvonal eredete és vírusérzékenysége miatt ideális modell a vírusreplikáció és a citopatogén hatások tanulmányozására.

Az LLC-MK2 sejtvonal ismert arról, hogy kémiailag meghatározott, szérummentes táptalajban tenyészthető, ami lehetővé teszi a kontrollált kísérleti körülmények alkalmazását. A kutatások bebizonyították, hogy ezek a sejtek a növekedés veszélyeztetése nélkül adaptálhatók szérummentes körülményekhez, bár a kezdeti tenyészetek jelentős mennyiségű lószérumot tartalmazó táptalajon voltak tartva. A kémiailag meghatározott táptalajokhoz való alkalmazkodás különösen előnyös a virológiai vizsgálatok számára, mivel minimalizálja a szérum által okozott változékonyságot, és támogatja a sejtvonalak hosszú távú fenntartását. Továbbá az LLC-MK2 vonalról kimutatták, hogy a primer majomvese sejtekhez hasonló vírusérzékenységet tart fenn, ami megbízható eszközzé teszi a vírus titrálási és vakcinagyártási vizsgálatokhoz.

A virológiában betöltött szerepe mellett az LLC-MK2-t tumorogén potenciálját is vizsgálták. Bár bizonyos transzformált tulajdonságokkal rendelkezik, például képes lágy agarban növekedni, in vivo modellekben nem képez tumort, ami korlátozott tumorigén kockázatra utal. Ez a tulajdonság még inkább aláhúzza hasznosságát mint in vitro vizsgálatok modellsejtvonalát, ugyanakkor megerősíti alkalmatlanságát terápiás vagy in vivo alkalmazásokra.

Szövet
Vese
Szinonimák
  • Llc-Mk2
  • LLC-MK-2
  • LLC-MK2 Original
  • LLCMK2
  • LLcMK2
  • Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

02Osztályozás

Organizmus
Rhesus makákó
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelialis

04Azonosítók

Hivatkozás
LLC-MK2 (Cytion katalógusszám: 305149)
NCBI adóazonosító szám
9544
Cellosaurus
CVCL_3009

05Kifejeződés és fogékonyság

Fehérjeexpresszió
Plazminogén-aktivátor

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
199-es közeg, w: 2,7 mM stabil glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion cikkszám: 820101a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt 1% lószérummal egészítsük ki
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Ültetési sűrűség
4 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
Felnőtt