Preskoči na vsebino
LLC-MK2
Tkivo
Ledvice
Sinonimi
Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

Dokumenti

LLC-MK2

Cell line · Številka izdelka 305149

LLC-MK2 is a continuous epithelial cell line established from the renal tissue of adult rhesus monkeys (*Macaca mulatta*). This cell line was originally i...

€430.00brez davka in stroškov poštnine
Na zalogi
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

LLC-MK2 je kontinuirana epitelijska celična linija, pridobljena iz ledvičnega tkiva odraslih opic rezus (*Macaca mulatta*). Ta celična linija je bila prvotno izolirana v petdesetih letih prejšnjega stoletja z trypsinizacijo skupnega ledvičnega tkiva šestih opic rezusov. Celice LLC-MK2 imajo adherentne rastne lastnosti in se zaradi visoke občutljivosti na različne viruse, vključno z virusom goveje virusne diareje 1, človeškim poliovirusom 1 in človeškim coxsackievirusom B4, pogosto uporabljajo v virologiji. Zaradi izvora in občutljivosti na viruse je celična linija idealen model za preučevanje replikacije virusov in citopatogenih učinkov.

Celična linija LLC-MK2 je znana po tem, da jo je mogoče gojiti v kemično določenih medijih brez seruma, kar omogoča nadzorovane eksperimentalne pogoje. Raziskave so pokazale, da je te celice mogoče prilagoditi pogojem brez seruma, ne da bi bila ogrožena rast, čeprav so bile začetne kulture vzdrževane v medijih, ki so vsebovali precejšnje količine konjskega seruma. Prilagoditev na kemično določena gojišča je še posebej koristna za virološke študije, saj zmanjšuje variabilnost, ki jo povzroča serum, in podpira dolgoročno vzdrževanje celičnih linij. Poleg tega je bilo dokazano, da linija LLC-MK2 ohranja občutljivost na viruse, primerljivo s primarnimi opičjimi ledvičnimi celicami, zaradi česar je zanesljivo orodje za študije titracije virusov in proizvodnje cepiv.

Poleg njene vloge v virologiji je bila linija LLC-MK2 raziskana tudi zaradi njenega tumorigenega potenciala. Čeprav ima nekatere preoblikovane lastnosti, kot je sposobnost rasti v mehkem agarju, v modelih in vivo ne tvori tumorjev, kar kaže na omejeno tumorigeno tveganje. Ta značilnost še dodatno poudarja njeno uporabnost kot modelne celične linije za študije in vitro, hkrati pa potrjuje njeno neprimernost za terapevtsko uporabo ali uporabo in vivo.

Tkivo
Ledvice
Sinonimi
  • Llc-Mk2
  • LLC-MK-2
  • LLC-MK2 Original
  • LLCMK2
  • LLcMK2
  • Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2

02Razvrstitev

Organizem
Rhesusov makak
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelijski

04Identifikatorji

Navajanje vira
LLC-MK2 (kataloška številka Cytion 305149)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9544
Cellosaurus
CVCL_3009

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija beljakovin
Aktivator plazminogena

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
Medij 199, w: 2,7 mM stabilnega glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (številka izdelka Cytion 820101a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 1 % konjskega seruma
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Gostota setve
4 x 104 celic/cm2
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
Odrasli