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J774A.1
Tessuto
Reticolo
Malattia
Sarcoma
Sinonimi
J-774A.1, J774A1, J774 A1, J774A.1, J 774A.1, J774 A.1

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J774A.1

Cell line · Codice prodotto 400220

The J774A.1 cell line was derived from the ascites tumour of a female BALB/c/NIH mouse during plasmacytoma-inducing treatment. The cells are known for the...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare J774A.1 è stata derivata dal tumore dell'ascite di una femmina di topo BALB/c/NIH durante un trattamento di induzione del plasmocitoma. Le cellule sono note per la loro capacità di eseguire la fagocitosi anticorpo-dipendente, che le rende uno strumento utile per studiare le risposte immunitarie a vari antigeni.

La crescita delle cellule J774A.1 è inibita da varie sostanze, tra cui destrano solfato, p-fenilendiammina (PPD) e lipopolisaccaride (LPS). Le cellule J774A.1 sintetizzano grandi quantità di lisozima e sono note per sintetizzare continuamente interleuchina-1 beta.
Le cellule J774A.1 hanno un tempo di raddoppiamento di 17 ore e possono essere coltivate nelle stesse condizioni dei macrofagi RAW 264.7. Inoltre, le cellule J774A.1 hanno un tempo di raddoppiamento di 17 ore. Inoltre, la linea cellulare J774A.1 è nota per esprimere geni specifici, tra cui l'interleuchina-1 (IL-1) e il lisozima, nonché marcatori di espressione specifici, come il complemento (C3) e il recettore Fc ad alta affinità, IgG (Fcgr1).

La linea cellulare J774A.1 è stata utilizzata in diversi studi di immunologia e di malattie infettive. Ad esempio, è stata utilizzata per studiare la citotossicità dei sali di triazolo[1,5-a] piridinio con attività leishmanicida e l'attività antitripanosomatica dei glicosidi flavonoidi isolati dalla specie Delphinium.

Nel complesso, le cellule J774A.1 sono uno strumento prezioso per studiare la funzione dei macrofagi, la sintesi di citochine e la risposta immunitaria a vari antigeni e patogeni.

Tessuto
Reticolo
Malattia
Sarcoma
Sinonimi
  • J-774A.1
  • J774A1
  • J774 A1
  • J774A.1
  • J 774A.1
  • J774 A.1

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Macrofago

04Identificatori

Riferimento bibliografico
J774A.1 (numero di catalogo Cytion 400220)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0358

05Espressione e suscettibilità

Recettori espressi
Immunoglobuline (Fc), complemento (C3)
Prodotti
Interleuchina-1 (interleuchina 1, IL-1, LAF), lisozima

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Si consiglia di staccare le cellule con un raschietto. Raccogliere le cellule in sospensione in una provetta da 15 ml e lavare delicatamente le cellule aderenti con PBS privo di calcio e magnesio (utilizzare 3-5 ml per le fiasche T25 e 5-10 ml per le fiasche T75). Applicare Accutase (1-2 ml per le beute T25, 2,5 ml per le beute T75) assicurando la copertura completa dello strato cellulare. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 10 minuti. Dopo l'incubazione, unire e centrifugare sia la sospensione che le cellule aderenti. Dopo la centrifugazione, risospendere accuratamente il pellet cellulare e trasferire la sospensione cellulare in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c
Età dei donatori
Adulti