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KLE
Tessuto
Utero, endometrio
Malattia
Adenocarcinoma endometriale

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KLE

Cell line · Codice prodotto 305051

The KLE cell line is an adherent cell line derived from the endometrium of a White, female patient with adenocarcinoma. This cell line was established fro...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare KLE è una linea cellulare aderente derivata dall'endometrio di una paziente bianca affetta da adenocarcinoma. Questa linea cellulare è stata ottenuta da una paziente di 64 giorni e da allora è diventata uno strumento fondamentale nella ricerca sul cancro dell'endometrio. Le cellule KLE sono state depositate da GR Richardson e sono note per le loro proprietà tumorigeniche, in quanto formano tumori entro 21 giorni con una frequenza del 100% quando vengono inoculate sottocute in topi nudi. Questi tumori non formano ghiandole, ma mostrano microvilli, complessi giunzionali e sistemi di canali nucleolari simili a quelli trovati nell'endometrio normale sotto stimolazione progestativa.

Le cellule KLE esprimono il gruppo sanguigno O e sono Rh-positive, il che può essere rilevante per studi specifici che riguardano l'espressione di antigeni. Questa linea cellulare è comunemente utilizzata per studiare la fisiopatologia del carcinoma endometriale, con particolare interesse per il suo stato negativo ai recettori degli estrogeni e positivo ai recettori del progesterone. Questo profilo recettoriale rende le cellule KLE molto adatte alla ricerca sul ruolo del progesterone nella progressione del cancro endometriale. Studi al microscopio elettronico di tumori derivati da cellule KLE hanno fornito informazioni dettagliate sull'ultrastruttura cellulare, rendendo questa linea cellulare una risorsa essenziale per la comprensione degli aspetti morfologici dell'adenocarcinoma endometriale.

Tessuto
Utero, endometrio
Malattia
Adenocarcinoma endometriale

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale
Tumorigenico
Sì, i tumori si sono sviluppati entro 21 giorni con una frequenza del 100% (5/5) nei topi nudi inoculati per via sottocutanea con 1×107 cellule.
Tempo di raddoppio
114 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KLE (numero di catalogo Cytion 305051)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1329

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
Gruppo sanguigno O, Rh+

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
2 volte a settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
64 anni
Etnia
Europeo