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KLE
Tecido
Útero, Endométrio
Doença
Adenocarcinoma do endométrio

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KLE

Cell line · Número do produto 305051

The KLE cell line is an adherent cell line derived from the endometrium of a White, female patient with adenocarcinoma. This cell line was established fro...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular KLE é uma linha celular aderente derivada do endométrio de uma doente branca, do sexo feminino, com adenocarcinoma. Esta linha celular foi estabelecida a partir de uma doente com 64 dias de idade e tornou-se, desde então, uma ferramenta vital na investigação do cancro do endométrio. As células KLE foram depositadas por GR Richardson e são conhecidas pelas suas propriedades tumorigénicas, uma vez que formam tumores em 21 dias com uma frequência de 100% quando inoculadas por via subcutânea em ratinhos nus. Estes tumores não formam glândulas, mas exibem microvilosidades, complexos juncionais e sistemas de canais nucleolares semelhantes aos encontrados no endométrio normal sob estimulação progestacional.

As células KLE expressam o tipo de sangue O e são Rh-positivas, o que pode ser relevante para estudos específicos que envolvam a expressão de antigénios. A linha celular é habitualmente utilizada para estudar a fisiopatologia do carcinoma do endométrio, com especial interesse no seu estatuto de recetor de estrogénio negativo e recetor de progesterona positivo. Este perfil de receptores torna as células KLE muito adequadas para a investigação do papel da progesterona na progressão do cancro do endométrio. Estudos de microscopia eletrónica de tumores derivados de células KLE forneceram informações detalhadas sobre a ultra-estrutura celular, tornando esta linha celular um recurso essencial para a compreensão dos aspectos morfológicos do adenocarcinoma do endométrio.

Tecido
Útero, Endométrio
Doença
Adenocarcinoma do endométrio

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Epitelial
Tumorigénico
Sim, os tumores desenvolveram-se em 21 dias com uma frequência de 100% (5/5) em ratos nude inoculados por via subcutânea com 1×107 células.
Tempo de duplicação
114 horas

04Identificadores

Referência
KLE (número de catálogo da Cytion 305051)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1329

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
Tipo de sangue O, Rh+

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
64 anos
Etnia
Europeu