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KPL-4
Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma infiammatorio della mammella
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
KPL4

Documenti

KPL-4

Cell line · Codice prodotto 305578

The KPL-4 cell line is a human breast cancer model originally derived from the malignant pleural effusion of a patient with inflammatory breast cancer. Th...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare KPL-4 è un modello di carcinoma mammario umano originariamente derivato dal versamento pleurico maligno di una paziente con carcinoma mammario infiammatorio. Questa linea cellulare presenta sovraespressione e amplificazione di HER2 (ErbB-2), oltre all'espressione di altri recettori della famiglia ErbB, tra cui HER1 (EGFR) e HER3. Queste caratteristiche la rendono particolarmente importante per lo studio dei meccanismi molecolari alla base dei tumori al seno aggressivi HER2-positivi e per la sperimentazione di terapie mirate.

Le cellule KPL-4 sono altamente tumorigeniche e sono state utilizzate per stabilire modelli di xenotrapianto in topi immunodeficienti. Questi modelli hanno dimostrato che i tumori KPL-4 secernono quantità significative di interleuchina-6 (IL-6), contribuendo alla cachessia negli animali ospiti. La secrezione di IL-6 è correlata al carico tumorale, evidenziando gli effetti sistemici della biologia tumorale nei tumori HER2-positivi. È importante notare che le cellule KPL-4 rispondono a terapie anti-HER2 come il trastuzumab, anche se l'efficacia in vivo di questi trattamenti è variabile, potenzialmente a causa della natura aggressiva di questo modello di cancro.

La linea cellulare è stata sfruttata anche nella ricerca terapeutica avanzata. Ad esempio, i coniugati farmacologici fotoattivanti anticorpo-mimetici (AMDC) che hanno come bersaglio l'HER2 hanno dimostrato efficacia nei modelli di xenotrapianto di KPL-4. Questi farmaci combinano un'azione specifica per l'HER2 con una terapia a base di farmaci per l'HER2. Queste terapie combinano molecole di legame specifiche per HER2 con carichi citotossici attivati dalla luce, ottenendo una riduzione significativa del tumore con effetti off-target minimi. Questi studi sottolineano l'utilità delle cellule KPL-4 nella valutazione di nuove modalità terapeutiche per il cancro al seno HER2-positivo.

Tessuto
Seno
Malattia
Carcinoma infiammatorio della mammella
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
  • KPL4

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Stato MSI
Stabile (MSS)

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KPL-4 (numero di catalogo Cytion 305578)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5310

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con TrypLE Express, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
2 volte a settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
52 anni
Etnia
Giapponese