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RKO-E6
Tessuto
Colon
Malattia
Carcinoma del colon
Sinonimi
RKOE6

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RKO-E6

Cell line · Codice prodotto 305135

RKO-E6 cells are a human colorectal carcinoma cell line derived from the RKO cell line through additional mutagenesis. These cells are commonly used in cance...

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01Informazioni generali

Descrizione
Le cellule RKO-E6 sono una linea cellulare di carcinoma colorettale umano derivata dalla linea cellulare RKO attraverso un'ulteriore mutagenesi. Queste cellule sono comunemente utilizzate nella ricerca sul cancro, in particolare sul cancro del colon-retto. La variante E6 della linea RKO offre un profilo distinto, utile per esaminare gli effetti di specifiche manipolazioni genetiche e studiare i meccanismi molecolari della tumorigenesi e delle metastasi nel cancro del colon-retto. Le cellule RKO-E6 sono caratterizzate da diverse caratteristiche uniche, tra cui alterazioni nei geni legati alla regolazione del ciclo cellulare, all'apoptosi e alle vie di riparazione del DNA. Queste modifiche aumentano l'utilità della linea cellulare per studiare gli effetti biologici del silenziamento o della sovraespressione dei geni in un contesto di cancro del colon-retto. Ad esempio, le cellule RKO-E6 sono state utilizzate per studiare l'impatto dei geni soppressori del tumore e degli oncogeni sul comportamento delle cellule tumorali, tra cui la proliferazione, l'invasione e la resistenza agli agenti chemioterapici. Inoltre, le cellule RKO-E6 sono utili negli studi volti a comprendere le risposte cellulari ai fattori di stress ambientale, come lo stress ossidativo e gli agenti che danneggiano il DNA, che sono rilevanti per la patogenesi e la progressione del cancro del colon-retto. Le loro robuste caratteristiche di crescita e la loro stabilità genetica le rendono un modello prezioso per saggi di screening ad alto rendimento per valutare l'efficacia di nuovi composti antitumorali. In sintesi, le cellule RKO-E6 rappresentano un modello fondamentale per approfondire le nostre conoscenze sulla biologia del cancro del colon-retto e per sviluppare e testare nuove strategie terapeutiche mirate a questa malattia prevalente e spesso mortale.
Tessuto
Colon
Malattia
Carcinoma del colon
Sinonimi
  • RKOE6

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This human colorectal carcinoma cell line (RKO-E6) contains a plasmid encoding HPV-16 E6 under CMV promoter control, possibly including CMV and HPV-6 sequences, enabling E6-dependent transformation studies. The construct is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
RKO-E6 (numero di catalogo Cytion 305135)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_3787

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.