Pāriet uz saturu
Lec1
Audums
Olnīcas
Sinonīmi
CHO-Lec1, CHO Lec1, Pro-Lec1.3C, Pro-5 Lec1.3c, Pro-5WgaRI3C

Dokumenti

Lec1

Cell line · Preces numurs 305010

The Lec1 cell line is a mutant clone selected for its resistance to wheat germ agglutinin, derived from the parental CHO clone Pro-5. This selection proce...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Lec1 šūnu līnija ir mutācijas klons, kas atlasīts tā izturības dēļ pret kviešu dīgļu aglutinīnu un iegūts no vecāka CHO klona Pro-5. Šī atlases procesa rezultātā tika iegūta šūnu līnija ar specifisku glikozilācijas defektu, kam raksturīga N-saistītu ogļhidrātu klātbūtne ar bloķētu Man5-GlcNAc2-Asn starpproduktu. Šis bloķējums ir saistīts ar N-acetilglukozaminiltransferāzes I (GlcNAc-TI) trūkumu, kas ir enzīms, kas ir būtisks glikānu sintēzes attīstībai uz sarežģītākām formām. Rezultātā Lec1 šūnas uzkrāj glikoproteīnus ar saīsinātiem, augsta manozes tipa oligosaharīdiem.

Lec1 šūnas ir nenovērtējamas glikoproteīnu biosintēzes pētījumos, jo īpaši, lai izprastu, kā izmainīta N-saistītā glikozilācija ietekmē šūnu funkcijas. Pētnieki izmanto Lec1 šūnas, lai pētītu glikozilācijas ietekmi uz proteīnu salipšanu, stabilitāti, receptoru funkciju un intracelulāro transportu. Turklāt šīs šūnas nodrošina unikālu platformu, lai pētītu vīrusu infekcijas vai ārējās DNS transfekcijas izraisītu endogēno glikoproteīnu kompartmentalizāciju. Vienkāršotās glikānu struktūras Lec1 šūnās padara tās ideālas arī tādu glikoproteīnu ražošanai, kurus ir vieglāk analizēt dažādos eksperimentālos kontekstos.

Tās galvenokārt izmanto in vitro mehānisma pētījumos un biotehnoloģiskās lietojumprogrammās, kas saistītas ar glikoproteīnu ražošanu un analīzi.

Audums
Olnīcas
Sinonīmi
  • CHO-Lec1
  • CHO Lec1
  • Pro-Lec1.3C
  • Pro-5 Lec1.3c
  • Pro-5WgaRI3C

02Klasifikācija

Organisms
Ķīniešu kāmītis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija

04Identifikatori

Atsauce
Lec1 (Cytion kataloga numurs 305010)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10029
Cellosaurus
CVCL_3440

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
Alpha MEM, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w/o: Ribonukleozīdi, w/o: Deoksiribonukleozīdi, w: 1,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
2 līdz 4 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
Pieaugušo