Przejdź do treści
HEK293-VEGFR2
Chusteczka
Nerka płodu
Choroba
Zmodyfikowane/unieśmiertelnione; nie wywołujące nowotworów (na tle komórek HEK293)
Synonimy
HEK293/VEGFR2

Dokumenty

HEK293-VEGFR2

Cell line · Numer produktu 305990

Zastrzeżenie: Podane ceny linii komórkowych dotyczą wyłącznie klientów akademickich i organizacji non-profit. W przypadku podmiotów komercyjnych ceny...

€1,900.00bez podatku i kosztów wysyłki

Dostosowanie / Zalecenia

Wykonane na zamówienie
1

01Informacje ogólne

Opis

Zastrzeżenie: Podane ceny linii komórkowych dotyczą wyłącznie klientów akademickich lub organizacji non-profit. Dla podmiotów komercyjnych cena wynosi około 6 250 euro.
Jeśli reprezentujesz podmiot komercyjny lub nie masz pewności, która kategoria ma zastosowanie, prosimy o kontakt.


Komórki HEK293-VEGFR2 to komórki ludzkiej embrionalnej nerki 293 (HEK293) zmodyfikowane genetycznie w celu stabilnej ekspresji ludzkiego receptora 2 czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGFR2/KDR/Flk-1), receptora kinazy tyrozynowej, który pełni rolę głównego mediatora sygnalizacji angiogenicznej stymulowanej przez VEGF. VEGFR2 jest wyrażany głównie na komórkach śródbłonka i odgrywa istotną rolę w rozwoju naczyń, proliferacji komórek śródbłonka, migracji, przepuszczalności i przeżywalności poprzez aktywację szlaków niższego rzędu, w tym kaskad sygnałowych rodzin MAPK/ERK, PI3K/AKT, PLCγ i SRC. Zaburzenia sygnalizacji VEGFR2 przyczyniają się do angiogenezy nowotworowej, zapalnej przebudowy naczyń i patologicznej neowaskularyzacji, co czyni ten receptor głównym celem w terapii onkologicznej i chorób naczyniowych.

Komórki HEK293-VEGFR2 są szeroko stosowane w badaniach nad angiogenezą i odkrywaniu leków do charakteryzowania przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko VEGFR2, inhibitorów kinazy tyrozynowej, pułapek ligandowych, przeciwciał bispecyficznych oraz leków biologicznych o działaniu antyangiogennym. Stabilny system ekspresji rekombinowanej umożliwia ilościową ocenę wiązania liganda VEGF, fosforylacji receptora, aktywacji sygnalizacji niższego rzędu, internalizacji receptora oraz siły działania inhibitorów. Komórki te są również powszechnie stosowane w testach reporterowych, badaniach wiązania opartych na cytometrii przepływowej, testach aktywności kinaz oraz procesach wysokoprzepustowego przesiewania terapeutycznego. Ponieważ komórki HEK293 umożliwiają solidną ekspresję białek rekombinowanych oraz wydajne namnażanie, stanowią one niezawodną platformę do opracowywania standardowych testów VEGFR2 oraz badań mechanizmów sygnalizacji.

Chusteczka
Nerka płodu
Choroba
Zmodyfikowane/unieśmiertelnione; nie wywołujące nowotworów (na tle komórek HEK293)
Zastosowania
Opracowywanie przeciwciał skierowanych przeciwko VEGFR2 (analogi ramucirumabu); badania nad angiogenezą; testy ADCC/CDC; cytometria przepływowa; badania przesiewowe terapii antyangiogennych; badania w dziedzinie onkologii i okulistyki
Synonimy
  • HEK293/VEGFR2

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a VEGFR2 (KDR/FLK-1) expression construct for vascular endothelial growth factor receptor studies and anti-angiogenic therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobny do nabłonka
Typ komórki
Komórki nabłonkowe
Czas podwojenia
ok. 24–36 godzin

04Identyfikatory

Źródło
HEK293-VEGFR2 (numer katalogowy Cytion 305990)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_D7C3

05Ekspresja i podatność

Receptory ulegające ekspresji
VEGFR2

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić pożywkę 10% FBS, 1 mM pirogronianu sodu, 10 mM HEPES, 1% NEAA. Dodać Geneticin (G418-Sulfat), aby osiągnąć końcowe stężenie 1 mg/ml.
Odczynnik dysocjacyjny
Trypsyna-EDTA
Hodowla komórek w subkulturze
W przypadku rutynowej hodowli komórek przylegających: Odessać starą pożywkę z przylegających komórek i przemyć je PBS w celu usunięcia pozostałości pożywki. Po odessaniu PBS, dodać odpowiednią objętość roztworu Trypsyna/EDTA w zależności od wielkości naczynia hodowlanego (np. 1 ml dla kolby T25, 3 ml dla kolby T75) i inkubować w temperaturze pokojowej lub 37°C do momentu odłączenia się komórek (5-10 minut). Monitoruj oderwanie pod mikroskopem i delikatnie postukaj w naczynie, jeśli to konieczne, aby uwolnić komórki. Po odłączeniu dodać pełną pożywkę w celu inaktywacji trypsyny/EDTA, delikatnie ponownie zawiesić komórki i przenieść porcję zawiesiny komórek do nowego naczynia hodowlanego zawierającego świeżą pożywkę. Umieść naczynie w inkubatorze ustawionym na 37°C z 5%CO2 i zmieniaj pożywkę co 2-3 dni.
Współczynnik podziału
od 1 do 5
Gęstość wysiewu
2 do 4 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia

Po rozmrożeniu podziel komórki w stosunku od 1:2 do 1:3 na kolby T25 i pozwól komórkom na regenerację po procesie zamrażania i przyleganie przez co najmniej 24 godziny.

Aby uzyskać najlepsze przyleganie i żywotność po rozmrożeniu komórek, zalecamy użycie kolb lub płytek pokrytych kolagenem do początkowego wysiewu po krioregeneracji. Powłoka kolagenowa nie jest wymagana do późniejszej rutynowej hodowli komórek.

Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
Płód