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CHO-NECTINA 4
Tecido
Ovário
Doença
Ovário de hamster chinês, não neoplásico; geneticamente modificado para a expressão da NECTIN4 (PVRL4) na superfície

Documentos

CHO-NECTINA 4

Cell line · Número do produto 305984

Aviso legal: Os preços apresentados para as linhas celulares destinam-se exclusivamente a clientes do setor académico ou sem fins lucrativos. Para entidades comerciais, os pre...

€1,900.00sem impostos nem portes de envio
Feito por encomenda
1

01Informações gerais

Descrição

Aviso legal: Os preços apresentados para as linhas celulares destinam-se exclusivamente a clientes académicos ou sem fins lucrativos. Para entidades comerciais, o preço é de aproximadamente 6 250 €. Se representar uma entidade comercial ou não tiver a certeza de qual a categoria que se aplica, contacte-nos.


As células CHO-NECTIN4 são uma linha celular recombinante estável de ovário de hamster chinês (CHO), modificada geneticamente para expressar a Nectina-4 humana (também conhecida como PVRL4 ou proteína 4 relacionada com o recetor do poliovírus), uma proteína transmembranar do tipo I pertencente à família das nectinas, um grupo de moléculas de adesão celular. A Nectina-4 é um antígeno associado a tumores bem estabelecido, que é sobreexpresso em vários tipos de tumores sólidos, incluindo o carcinoma urotelial da bexiga, o cancro da mama, o cancro do pulmão de células não pequenas e o cancro do pâncreas, tornando-a um alvo clinicamente validado para conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) e outras imunoterapias direcionadas. O ADC enfortumab vedotin, que tem como alvo a Nectina-4, está aprovado para o tratamento do carcinoma urotelial, o que sublinha a relevância terapêutica deste antígeno.

As células CHO-NECTIN4 são amplamente utilizadas para o desenvolvimento e caracterização de anticorpos direcionados contra a Nectina-4, ADCs, anticorpos bispecíficos e terapias com células CAR-T. O sistema de expressão recombinante estável permite a realização de ensaios de ligação quantitativos, avaliações de citotoxicidade ADCC/CDC, estudos de internalização de recetores e triagem de anticorpos de alto rendimento por citometria de fluxo. A origem CHO proporciona uma baixa expressão endógena da maioria dos antigénios de superfície humanos, garantindo que os sinais observados sejam atribuíveis ao transgene Nectin-4 expresso de forma estável. Esta linha celular está validada para utilização em fluxos de trabalho de descoberta de fármacos, seleção de candidatos pré-clínicos e estudos mecanísticos da biologia do recetor Nectin-4.

Tecido
Ovário
Doença
Ovário de hamster chinês, não neoplásico; geneticamente modificado para a expressão da NECTIN4 (PVRL4) na superfície
Aplicações
Rastreio de anticorpos; desenvolvimento de ADC; desenvolvimento de terapias direcionadas para a NECTIN4; investigação sobre o cancro urotelial e da mama; citometria de fluxo

02Classificação

Organismo
Hamster chinês
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Adesão e suspensão
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This CHO cell line contains a NECTIN4 expression cassette supporting receptor-function analyses. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células epiteliais
Tempo de duplicação
aprox. 14-16 horas

04Identificadores

Referência
CHO-NECTIN4 (número de catálogo da Cytion 305984)
Número de identificação fiscal do NCBI
10029
Cellosaurus
CVCL_A8W9

05Expressão e suscetibilidade

Antigénios de superfície
NECTINA 4 (PVRL4/CD112R)

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura

Para culturas aderentes: DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L Glucose, w: 2.5 mM L-Glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM Piruvato de sódio, w: 1.2 g/L NaHCO3 (Cytion artigo número 820400a)

Para culturas em suspensão: CHO Growth Medium A (da InSCREENeX; número de catálogo da InSCREENeX INS-ME-1039)

Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Para culturas aderentes: Suplementar o meio com 5% de FBS. Adicionar Geneticin (G418-Sulfat) para obter uma concentração final de 0,5 mg/mL.
Reagente de dissociação
Para culturas aderentes: Tripsina-EDTA
Subcultura
Para cultura de rotina de células aderentes: Aspirar o meio de cultura antigo das células aderentes e lavá-las com PBS para remover qualquer meio restante. Depois de aspirar o PBS, adicionar o volume adequado de solução de tripsina/EDTA com base no tamanho do recipiente de cultura (por exemplo, 1 ml para um frasco T25, 3 ml para um frasco T75) e incubar à temperatura ambiente ou a 37°C durante 5-10 minutos, ou até as células se destacarem. Monitorizar o desprendimento sob um microscópio e, se necessário, bater suavemente no recipiente para libertar as células. Uma vez desprendidas, adicionar meio completo para inativar a tripsina/EDTA, ressuspender suavemente as células e transferir uma alíquota da suspensão de células para um novo recipiente de cultura contendo meio fresco. Colocar o recipiente numa incubadora regulada para 37°C com 5%de CO2 e mudar o meio a cada 2-3 dias.
Rácio de divisão
1 a 5
Densidade de sementeira
2 a 5 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento

Após a descongelação, dividir as células numa proporção de 1:2 a 1:3 em frascos T25 e deixar as células recuperar do processo de congelação e aderir (para culturas aderentes) durante pelo menos 24 horas.

Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
Adulto