Cellules HMC3

La lignée cellulaire « Human Microglial Clone 3 » (HMC3) a été mise au point en 1995 par l’équipe du professeur Tardieu grâce à l’immortalisation, par le virus SV40, de cellules microgliales issues de tissus de la moelle épinière et du cortex cérébral humains, provenant d’embryons âgés de 8 à 12 semaines. Ces cellules primaires, caractérisées par une division lente et des morphologies complexes, ont d’abord été cultivées pendant 10 à 15 jours avant leur immortalisation. Les cellules HMC3 ont conservé plusieurs caractéristiques clés des microglies primaires, telles qu’une expression variée de marqueurs myéloïdes comme le CD68, le CD11b et le CD14, bien que les niveaux d’expression aient varié de façon notable selon le choix de l’anticorps primaire, en particulier pour le CD68.

Après immortalisation, les cellules HMC3 ont présenté des taux de prolifération accrus, avec des temps de doublement compris entre 24 et 48 heures, tout en conservant de nombreuses caractéristiques phénotypiques et morphologiques de leurs homologues primaires. Il convient de noter qu’on observait une proportion plus élevée de cellules positives pour le CD68 EBM/11 et une réduction de l’activité phagocytaire par rapport aux cellules primaires. La stabilité de l’expression antigénique a été confirmée sur 35 passages, les cellules demeurant positives pour NSE, CD68 et CD11b, mais négatives pour CD14, MHCII et CD4 dans des conditions de base. Cependant, l’exposition à l’interféron-γ (IFNγ) a entraîné une augmentation de l’expression du CMHII, ce qui correspond davantage aux réponses observées dans les cultures primaires soumises au même traitement.

Sur le plan fonctionnel, la lignée HMC3 s’est distinguée en produisant des niveaux plus élevés d’interleukine-6 (IL-6) dans des conditions de base par rapport aux autres clones. Malgré cela, une comparaison directe avec la production de cytokines des cellules microgliales primaires demeure difficile en raison de différences méthodologiques. La réponse à la stimulation par le lipopolysaccharide (LPS) dans ces lignées immortalisées semblait atténuée par rapport aux cultures primaires. Conformément aux caractéristiques des microglies primaires, la lignée HMC3 et les autres lignées clonées ne produisaient pas de facteur de nécrose tumorale alpha (TNFα), ni spontanément ni à la suite d’une stimulation pro-inflammatoire, ce qui met en évidence un trait spécifique des microglies embryonnaires humaines.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.